| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩写说明 | 第9-15页 |
| 第1章 绪论 | 第15-30页 |
| ·糖肽类抗生素的研究进展 | 第15-17页 |
| ·糖肽类抗生素的发现，结构特征与抗菌机制 | 第15-16页 |
| ·新型糖肽类抗生素研发 | 第16-17页 |
| ·在天然产物存在的卤化物的发现 | 第17页 |
| ·参与抗生素合成中的卤化酶的研究 | 第17-18页 |
| ·糖基在抗生素中的作用 | 第18页 |
| ·参与抗生素生物合成的糖基转移酶的研究 | 第18-19页 |
| ·雷莫拉宁的研究进展 | 第19-21页 |
| ·雷莫拉宁的结构特征、生物活性与作用机制 | 第19-20页 |
| ·雷莫拉宁的生物合成基因研究 | 第20-21页 |
| ·立题依据 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-30页 |
| 第2章 三株产雷莫拉宁新衍生物的基因工程菌株发酵条件的优化 | 第30-59页 |
| ·材料与仪器 | 第30-32页 |
| ·出发菌株 | 第30页 |
| ·实验试剂 | 第30-31页 |
| ·实验仪器和设备 | 第31-32页 |
| ·初始培养基 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-39页 |
| ·三株基因工程菌株的培养 | 第32-33页 |
| ·三株基因工程菌株的自然选育 | 第33页 |
| ·自然选育 | 第33页 |
| ·菌种的保藏 | 第33-34页 |
| ·斜面培养基及培养条件的优化 | 第34页 |
| ·斜面培养基对斜面生长状态及效价影响考察 | 第34页 |
| ·斜面培养时间、温度对效价的影响 | 第34页 |
| ·斜面放置的温度对效价的影响 | 第34页 |
| ·种子培养基的优化及培养条件的优化 | 第34-35页 |
| ·种子培养基的优化 | 第34-35页 |
| ·种子培养基PH的考察 | 第35页 |
| ·种龄的选择 | 第35页 |
| ·种子培养条件的优化 | 第35页 |
| ·发酵培养基与培养条件的优化 | 第35-38页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第35-37页 |
| ·发酵培养基PH对发酵效价影响的考察 | 第37页 |
| ·接种量对发酵效价的影响的考察 | 第37页 |
| ·培养温度发酵效价的影响的考察 | 第37页 |
| ·摇瓶装载量和摇床转速的考察 | 第37-38页 |
| ·分析检测方法 | 第38-39页 |
| ·显微镜镜检 | 第38页 |
| ·PH值的测定 | 第38页 |
| ·效价的检测 | 第38页 |
| ·HPLC检测 | 第38-39页 |
| ·相对效价计算 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-55页 |
| ·三株基因工程出发菌株的自然分离 | 第39-41页 |
| ·SIPI-A.DORF29-2016 菌保藏方法的比较 | 第41-42页 |
| ·出发菌株和高产菌株的相关特性的比较 | 第42页 |
| ·斜面培养基及培养条件的优化 | 第42-44页 |
| ·斜面培养基的确定 | 第42-43页 |
| ·斜面培养温度、时间对基因工程菌株发酵的影响 | 第43-44页 |
| ·斜面放置温度对效价的影响 | 第44页 |
| ·种子培养基的优化 | 第44-46页 |
| ·种子培养基的优化 | 第44-45页 |
| ·种子培养基PH的考察 | 第45页 |
| ·种龄的选择 | 第45-46页 |
| ·种子培养条件的优化 | 第46页 |
| ·种子培养温度对效价的影响 | 第46页 |
| ·种子摇床转速对发酵效价的影响 | 第46页 |
| ·发酵培养基的优化 | 第46-54页 |
| ·对碳源的考察 | 第46-49页 |
| ·对氮源的考察 | 第49-51页 |
| ·无机盐对效价的影响 | 第51-53页 |
| ·氨基酸的添加实验 | 第53页 |
| ·发酵培养基PH的考察 | 第53-54页 |
| ·接种量对发酵效价的影响 | 第54页 |
| ·发酵培养条件的优化 | 第54-55页 |
| ·培养温度 | 第54-55页 |
| ·对装载量与摇床转数的考察 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·本章小结 | 第56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 第3章 三株雷莫拉宁基因工程菌产物的分离纯化 | 第59-83页 |
| ·试剂与仪器 | 第59-60页 |
| ·主要试剂 | 第59页 |
| ·主要仪器 | 第59-60页 |
| ·层析填料 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60-65页 |
| ·分析方法 | 第60页 |
| ·雷莫拉宁的理化特征 | 第60-61页 |
| ·发酵液预处理 | 第61-62页 |
| ·雷莫拉宁类似物的稳定性的考察 | 第61页 |
| ·考察不同酸溶液调节三种雷莫拉宁类似物发酵液PH对预处理的影响 | 第61页 |
| ·考察不同有机溶剂对三种雷莫拉宁类似物抽提效果的影响 | 第61页 |
| ·考察乙醇浓度对三种雷莫拉宁类似物抽提效果的影响 | 第61-62页 |
| ·考察同浓度的乙醇与三种工程菌的菌饼比例对抽提效果的影响 | 第62页 |
| ·考察抽提时间对三种雷莫拉宁类似物抽提效果的影响 | 第62页 |
| ·考察不同PH对三种雷莫拉宁类似物抽提效果的影响 | 第62页 |
| ·考察超声对三种雷莫拉宁类似物抽提效果的影响 | 第62页 |
| ·考察抽提次数对三种雷莫拉宁类似物抽提效果的影响 | 第62页 |
| ·三种雷莫拉宁类似物抽提液色素的去除 | 第62-63页 |
| ·三种雷莫拉宁类似物进一步纯化 | 第63页 |
| ·六种大孔吸附树脂对无糖雷莫拉宁发酵液静态吸附与解吸条件的考察 | 第63页 |
| ·SP825树脂对无糖雷莫拉宁动态吸附与解吸条件的考察 | 第63-64页 |
| ·无糖雷莫拉宁纯品的制备 | 第64-65页 |
| ·三种雷莫拉宁类似物的结构验证 | 第65页 |
| ·雷莫拉宁类似物生物活性的检测 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-78页 |
| ·发酵液的预处理 | 第65-70页 |
| ·雷莫拉宁类似物的酸碱稳定性考察 | 第65-66页 |
| ·雷莫拉宁类似物对温度的稳定性考察 | 第66-67页 |
| ·不同有机溶剂对无糖雷莫拉宁发酵液的抽提效果的影响 | 第67页 |
| ·不同乙醇浓度对无糖雷莫拉宁发酵液抽提效果的影响 | 第67页 |
| ·同浓度乙醇对菌饼不同比例对无糖雷莫拉宁抽提效果的影响 | 第67-68页 |
| ·抽提时间对无糖雷莫拉宁抽提效果的影响 | 第68页 |
| ·抽提时不同PH对无糖雷莫拉宁抽提效果的影响 | 第68-69页 |
| ·超声处理对无糖雷莫拉宁抽提效果的影响 | 第69页 |
| ·抽提次数对无糖雷莫拉宁抽提效果的影响 | 第69-70页 |
| ·无糖雷莫拉宁抽提液色素的去除 | 第70页 |
| ·无糖雷莫拉宁的粗品制备 | 第70-72页 |
| ·大孔吸附树脂对无糖雷莫拉宁静态吸附与解吸条件的考察 | 第70-71页 |
| ·考察树脂SP825对无糖雷莫拉宁动态吸附与解吸条件 | 第71-72页 |
| ·无糖雷莫拉宁纯品的制备 | 第72-74页 |
| ·无糖雷莫拉宁粗品分离纯化工艺的研究 | 第74-75页 |
| ·无糖雷莫拉宁C18柱的中低压液相制备 | 第75-76页 |
| ·无糖雷莫拉宁C18柱的高效液相的半制备 | 第76页 |
| ·三种雷莫拉宁类似物的结构验证 | 第76-77页 |
| ·三种雷莫拉宁类似物抑菌活性 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·本章小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-83页 |
| 第4章 参与雷莫拉宁生物合成基因卤化酶的研究 | 第83-106页 |
| ·仪器和材料 | 第83-85页 |
| ·实验中的质粒 | 第83-84页 |
| ·菌株 | 第84页 |
| ·主要生化试剂 | 第84页 |
| ·主要仪器 | 第84-85页 |
| ·培养基 | 第85页 |
| ·主要溶液和缓冲液 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-95页 |
| ·所需菌种的培养和贮存 | 第85-86页 |
| ·制备大肠杆菌基因组DNA | 第86页 |
| ·制备大肠杆菌TRANSB(DE3)、E.COLIBL21 (DE3)和E.COLIDH5Α感受态细胞 | 第86页 |
| ·构建目的质粒的转化 | 第86-87页 |
| ·SDS碱裂解法小量制备质粒DNA | 第87页 |
| ·PCR反应液或酶切反应液中DNA片段的纯化 | 第87页 |
| ·胶回收DNA目的基因片段 | 第87-88页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第88页 |
| ·目的基因的酶切和连接 | 第88页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第88-89页 |
| ·构建重组质粒 | 第89-90页 |
| ·粗酶液的制备 | 第90页 |
| ·卤化酶与FAD还原酶的试表达 | 第90页 |
| ·卤化酶与FAD还原酶表达条件的优化 | 第90-92页 |
| ·粗酶液中目的蛋白含量的测定 | 第92页 |
| ·SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第92-93页 |
| ·HISPUR NI NTA纯化卤化酶 | 第93-94页 |
| ·FAD还原酶活性的测定 | 第94-95页 |
| ·ORF20卤化酶活性的测定 | 第95页 |
| ·实验结果 | 第95-103页 |
| ·ORF20卤化酶表达质粒的构建 | 第95-96页 |
| ·FAD还原酶表达质粒的构建 | 第96页 |
| ·目的蛋白在E.COLIBL21或TRANSB(DE3)中的试表达 | 第96-97页 |
| ·卤化酶在E.COLIBL21-ORF20菌株表达条件的优化 | 第97-98页 |
| ·FAD还原酶在E.COLI.BL21-FRE菌株中表达条件的确定 | 第98-100页 |
| ·卤化酶在TRANSB(DE3)-ORF20菌株中表达条件的确定 | 第100-101页 |
| ·HISPUR NI NTA纯化卤化酶 | 第101-102页 |
| ·粗酶液中氯化酶与FAD还原酶含量的测定 | 第102-103页 |
| ·FAD还原酶酶活的确定 | 第103页 |
| ·讨论 | 第103-104页 |
| ·本章小结 | 第104页 |
| 参考文献 | 第104-106页 |
| 全文总结 | 第106-109页 |
| 创新性分析 | 第109-110页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第110-111页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、专利申请 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
