| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 英文缩写说明 | 第11-20页 |
| 第一部分 莽草酸 | 第20-87页 |
| 第1章 绪论（莽草酸） | 第21-43页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·莽草酸的理化性质 | 第21-22页 |
| ·莽草酸及其衍生物的药理作用 | 第22-24页 |
| ·抗病毒 | 第23页 |
| ·抗肿瘤 | 第23页 |
| ·抗炎 | 第23-24页 |
| ·对心脑血管系统的作用 | 第24页 |
| ·莽草酸的生产方法 | 第24-25页 |
| ·植物提取法 | 第24页 |
| ·化学合成法 | 第24-25页 |
| ·生物合成法 | 第25页 |
| ·莽草酸途径 | 第25-27页 |
| ·莽草酸生产菌株的构建策略及研究进展 | 第27-37页 |
| ·切断或限制下游反应 | 第27-28页 |
| ·PTS系统的改造 | 第28-29页 |
| ·减少副产物的产生 | 第29-30页 |
| ·关键酶基因的过表达 | 第30-31页 |
| ·中心碳代谢途径的改造 | 第31页 |
| ·辅因子NADPH的再生 | 第31-33页 |
| ·异源途径的引入 | 第33页 |
| ·微生物生产莽草酸的研究进展 | 第33-37页 |
| ·基因组编辑技术 | 第37-40页 |
| ·同源重组技术 | 第37-38页 |
| ·人工核酸内切酶介导的靶向基因组编辑技术 | 第38-40页 |
| ·合成生物学及其应用 | 第40-41页 |
| ·生物医药 | 第40-41页 |
| ·生物能源 | 第41页 |
| ·本课题研究意义与内容 | 第41-43页 |
| 第2章 多基因共表达策略提高莽草酸产量 | 第43-63页 |
| ·引言 | 第43-44页 |
| ·实验材料 | 第44-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第44-46页 |
| ·引物 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·仪器和设备 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-52页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第48页 |
| ·质粒构建 | 第48-50页 |
| ·基因敲除 | 第50-51页 |
| ·菌株 λDE3溶源化 | 第51页 |
| ·质粒的诱导表达 | 第51-52页 |
| ·莽草酸的含量测定 | 第52页 |
| ·数据分析 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-60页 |
| ·质粒构建 | 第52-53页 |
| ·质粒在BL21(?aro L/aro K, DE3)中的表达 | 第53-54页 |
| ·BL21来源重组菌株的生长及SA产量 | 第54-56页 |
| ·菌株BW25113(?aro L/aro K)的构建 | 第56页 |
| ·菌株BW25113 (?aro L/aro K)的 λDE3溶源化 | 第56-57页 |
| ·质粒在BW25113(?aro L/aro K, DE3)中的表达 | 第57-58页 |
| ·碳源对BW25113来源重组菌株SA生产的影响 | 第58-59页 |
| ·基因敲除及质粒对菌株生长及SA生产的影响 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-63页 |
| 第3章 基因定点整合策略提高莽草酸产量 | 第63-87页 |
| ·引言 | 第63-64页 |
| ·实验材料 | 第64-68页 |
| ·菌株和质粒 | 第64-66页 |
| ·引物 | 第66-67页 |
| ·主要试剂 | 第67页 |
| ·培养基及培养条件 | 第67-68页 |
| ·仪器和设备 | 第68页 |
| ·实验方法 | 第68-72页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第68页 |
| ·质粒构建 | 第68-69页 |
| ·整合PT7-aro G-aro B-PT7-tkt A-aro E-T7 terminator片段到pts HIcrr位点 | 第69-70页 |
| ·继续整合PT7-glk-PT7-gal P-T7 terminator片段到pts HIcrr位点 | 第70-71页 |
| ·整合PT7-pps A-T7 terminator片段到tyr R位点 | 第71-72页 |
| ·分析检测方法 | 第72页 |
| ·数据分析 | 第72页 |
| ·结果与讨论 | 第72-85页 |
| ·质粒构建 | 第72-73页 |
| ·基因整合 | 第73-74页 |
| ·PTS系统失活对菌株的影响 | 第74-75页 |
| ·IPTG对基因整合菌株生长及SA生产的影响 | 第75-76页 |
| ·通过质粒继续过表达关键基因进一步提高SA产量 | 第76-77页 |
| ·培养基及培养条件优化 | 第77-80页 |
| ·整合基因glk和gal P提高葡萄糖转运速率 | 第80-81页 |
| ·在tyr R位点处整合pps A基因提高SA产量 | 第81-82页 |
| ·发酵罐放大培养 | 第82-83页 |
| ·使用混合碳源提高SA产量及单位时间产率 | 第83-85页 |
| ·本章小结 | 第85-87页 |
| 第二部分 白藜芦醇 | 第87-126页 |
| 第4章 绪论（白藜芦醇） | 第88-103页 |
| ·引言 | 第88页 |
| ·白藜芦醇的理化性质 | 第88-89页 |
| ·白藜芦醇及其衍生物的药理作用 | 第89-91页 |
| ·心血管保护 | 第90页 |
| ·抗癌 | 第90页 |
| ·抗炎 | 第90-91页 |
| ·抗氧化及延缓衰老 | 第91页 |
| ·其它药理作用 | 第91页 |
| ·白藜芦醇的生产方法 | 第91-93页 |
| ·植物提取法 | 第91-92页 |
| ·化学合成法 | 第92页 |
| ·生物合成法 | 第92-93页 |
| ·白藜芦醇代谢途径 | 第93-94页 |
| ·白藜芦醇生产菌株的构建策略及研究进展 | 第94-102页 |
| ·宿主菌的选择 | 第94-95页 |
| ·外源基因的选择及其密码子优化 | 第95页 |
| ·蛋白适配比的优化 | 第95-96页 |
| ·增加底物丙二酰Co A的供应 | 第96页 |
| ·培养方式的选择 | 第96-97页 |
| ·强化上游代谢途径基因实现Res从头合成 | 第97页 |
| ·其它策略 | 第97页 |
| ·微生物生产白藜芦醇的研究进展 | 第97-102页 |
| ·本课题研究意义与内容 | 第102-103页 |
| 第5章 白藜芦醇的合成生物学研究 | 第103-126页 |
| ·引言 | 第103-104页 |
| ·实验材料 | 第104-109页 |
| ·菌株和质粒 | 第104-108页 |
| ·引物 | 第108页 |
| ·主要物品和试剂 | 第108页 |
| ·培养基及培养条件 | 第108页 |
| ·仪器和设备 | 第108-109页 |
| ·实验方法 | 第109-113页 |
| ·常规分子生物学操作 | 第109页 |
| ·质粒构建 | 第109页 |
| ·整合PT7-sts-T7 terminator片段到tyr R位点 | 第109-110页 |
| ·整合PT7-tal-PT7-4cl-T7 terminator片段到trp ED位点 | 第110-111页 |
| ·整合PT7-mat C-PT7-mat B-T7 terminator片段到phe LA位点 | 第111-112页 |
| ·整合PT7-aro G-aro B-PT7-tkt A-aro E-T7 terminator片段和PT7-glk-PT7-gal P-T7terminator片段到pts HIcrr位点 | 第112页 |
| ·发酵样品处理及Res分析检测方法 | 第112-113页 |
| ·发酵副产物制备及分离纯化 | 第113页 |
| ·数据分析 | 第113页 |
| ·结果与讨论 | 第113-125页 |
| ·质粒构建 | 第113-114页 |
| ·基因整合 | 第114页 |
| ·白藜芦醇稳定性考察 | 第114-116页 |
| ·顺反式白藜芦醇的转化 | 第116-117页 |
| ·重组菌株Res1从头合成Res | 第117-118页 |
| ·不同样品处理方式对白藜芦醇提取率的影响 | 第118页 |
| ·菌株Res1合成Res限制性因素的探讨 | 第118-120页 |
| ·继续整合基因进一步提高Res产量 | 第120页 |
| ·发酵副产物的发现 | 第120-121页 |
| ·使用UPLC色谱柱对副产物的确定 | 第121-123页 |
| ·副产物Res-der2的制备及其鉴定 | 第123-124页 |
| ·副产物Res-der1的制备及其鉴定 | 第124-125页 |
| ·本章小结 | 第125-126页 |
| 全文总结 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-143页 |
| 创新性分析 | 第143-144页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第144-145页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与专利申请 | 第145-146页 |
| 致谢 | 第146-148页 |
| 附录 | 第148-153页 |
