| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-20页 |
| ·本课题研究的背景及意义 | 第10页 |
| ·国内外研究现状 | 第10-18页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸简介 | 第10-11页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸的产生菌 | 第11-12页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸的代谢途径 | 第12-13页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸的合成方法研究进展 | 第13-14页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸的应用领域 | 第14-18页 |
| ·本论文研究内容 | 第18-20页 |
| 第2章 ALA生物合成关键酶基因的克隆及表达载体的构建 | 第20-32页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·培养条件 | 第21页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第21页 |
| ·仪器设备 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-28页 |
| ·Rhodobacter sphaeroides基因组的提取 | 第22-23页 |
| ·引物设计与hemA目的基因的扩增 | 第23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第23-24页 |
| ·DNA的纯化回收 | 第24页 |
| ·克隆载体pEASYT-hemA的构建 | 第24-26页 |
| ·原核表达载体pET30a-hemA的构建 | 第26-28页 |
| ·结果与讨论 | 第28-31页 |
| ·目的基因hemA的扩增结果 | 第28-29页 |
| ·克隆载体的构建与重组子的鉴定 | 第29-30页 |
| ·表达载体的构建与重组子的鉴定 | 第30-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 第3章 ALA合成酶基因在E.coli中的诱导表达及条件优化 | 第32-46页 |
| ·实验材料 | 第33页 |
| ·菌株与质粒 | 第33页 |
| ·培养条件 | 第33页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-37页 |
| ·重组质粒pET30a-hemA在E.coli BL21(DE3)中的诱导表达 | 第33-36页 |
| ·工程菌发酵条件的优化 | 第36-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-44页 |
| ·重组质粒pET30a-hemA在E.coli BL21(DE3)中的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·培养基的优化 | 第38-40页 |
| ·诱导温度的影响 | 第40-42页 |
| ·前体的影响 | 第42-44页 |
| ·本章小结 | 第44-46页 |
| 第4章 5-氨基乙酰丙酸C4生物合成途径工程菌的构建 | 第46-58页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌株与质粒 | 第47-48页 |
| ·培养条件 | 第48页 |
| ·工具酶和主要试剂 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-51页 |
| ·ALA C4生物合成途径相关基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·DNA切胶回收 | 第49-50页 |
| ·克隆载体的构建 | 第50页 |
| ·共表达载体pETA、pETAC、pETACY的构建及诱导表达 | 第50-51页 |
| ·RT-PCR验证基因的转录 | 第51页 |
| ·蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第51页 |
| ·5-氨基乙酰丙酸的测定 | 第51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-57页 |
| ·目的基因hemA、Cat、YBi的克隆 | 第51-52页 |
| ·克隆载体的构建及重组子的鉴定 | 第52-53页 |
| ·共表达载体pETA、pETAC、pETACY的构建 | 第53-55页 |
| ·hemA、Cat、YBi的转录与表达 | 第55-56页 |
| ·共表达hemA和Cat以及hemA、Cat和YBi对ALA产量的影响 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-58页 |
| 结论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 攻读硕士学位期间所发表的论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
