| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| ·CYP450 酶 | 第11-14页 |
| ·CYP2C9 基因多态性与基因频率分布 | 第14-18页 |
| ·与 CYP2C9 相关的药物相互作用 | 第18-19页 |
| ·本研究的内容及意义 | 第19-20页 |
| 第二章 材料和方法 | 第20-23页 |
| ·材料、试剂和仪器 | 第20-23页 |
| ·材料 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| ·仪器 | 第20页 |
| ·溶液的配置 | 第20-23页 |
| 第三章 实验内容 | 第23-36页 |
| ·CYP2C9 突变体生物信息学分析 | 第23页 |
| ·CYP2C9 突变体三维结构分析 | 第23页 |
| ·CYP2C9 物理性质分析 | 第23页 |
| ·CYP2C9 突变等位基因检测 | 第23-28页 |
| ·全血基因组 DNA 的提取 | 第23页 |
| ·CYP2C9 基因扩增的引物设计 | 第23-24页 |
| ·CYP2C9 基因的扩增及扩增产物的检测 | 第24-27页 |
| ·PCR 产物的酶切 | 第27-28页 |
| ·PAGE-银染进行基因分型 | 第28页 |
| ·CYP2C9 野生型基因重组表达质粒的构建 | 第28-33页 |
| ·CYP2C9 野生型基因 cDNA 的克隆 | 第29-31页 |
| ·pET-32a 质粒载体的提取、双酶切、胶回收纯化 | 第31页 |
| ·CYP2C9 基因的双酶切、胶回收纯化 | 第31-32页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第32页 |
| ·BL21 感受态细胞的制备及转化效率检测 | 第32-33页 |
| ·重组表达载体转化及鉴定 | 第33页 |
| ·CYP2C9 突变体基因重组表达质粒的构建 | 第33-36页 |
| ·重叠延伸 PCR | 第33-34页 |
| ·CYP2C9*16 突变型重组子的获取 | 第34页 |
| ·CYP2C9 突变型重组子转化 | 第34页 |
| ·CYP2C9 野生型及突变型重组蛋白的原核表达 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第34-36页 |
| 第四章 结果与讨论 | 第36-61页 |
| ·CYP2C9 各突变体生物信息学分析结果 | 第36-43页 |
| ·CYP2C9 各突变型蛋白空间构型分析 | 第36-39页 |
| ·各 CYP2C9 蛋白物理性质分析 | 第39-43页 |
| ·DNA 提取结果 | 第43页 |
| ·CYP2C9 等位基因的检测 | 第43-53页 |
| ·CYP2C9*14 等位基因的检测 | 第43-45页 |
| ·CYP2C9*25 等位基因的检测 | 第45-46页 |
| ·CYP2C9*26 等位基因的检测 | 第46-47页 |
| ·CYP2C9*30 等位基因的检测 | 第47-49页 |
| ·CYP2C9*33 等位基因的检测 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·CYP2C9 野生型及突变型基因的克隆及原核表达 | 第53-61页 |
| ·HepG2 肝癌细胞培养及 RNA 提取 | 第53页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第53-54页 |
| ·RT-PCR 产物 TA 克隆阳性质粒的鉴定 | 第54-55页 |
| ·表达载体 pET-32a 质粒及 CYP2C9 野生型基因 cDNA 的双酶切 | 第55-57页 |
| ·重组质粒 pET-32a-2C9*1 的鉴定 | 第57页 |
| ·重组质粒 pET-32a-2C9*16 的鉴定 | 第57-59页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第67-70页 |
| 附录 1 载体图谱 | 第70-71页 |
| 附录 2 多态位点字母含义 | 第71-72页 |
| 附件 3 测序结果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
