| 目录 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-23页 |
| 1 植物耐盐基因的克隆 | 第15-17页 |
| ·编码渗透保护物质的耐盐基因 | 第15-16页 |
| ·维持离子平衡的耐盐基因 | 第16页 |
| ·消除活性氧伤害的耐盐基因 | 第16页 |
| ·盐胁迫条件下细胞信号传导蛋白编码基因 | 第16-17页 |
| ·与耐盐相关基因的转录因子 | 第17页 |
| 2 脯氨酸在耐盐中的作用 | 第17-18页 |
| 3 脯氨酸的代谢 | 第18-19页 |
| ·脯氨酸在植物中的合成 | 第18页 |
| ·植物中脯氨酸的降解 | 第18-19页 |
| 4 植物脯氨酸脱氢酶(ProDH)编码基因的研究进展 | 第19-20页 |
| 5 脯氨酸脱氢酶(ProDH)在植物中的功能 | 第20-21页 |
| ·参与脯氨酸的分解代谢 | 第20-21页 |
| ·通过脯氨酸谷氨酸代谢产生活性氧ROS | 第21页 |
| 6 脯氨酸脱氢酶编码基因的启动子研究 | 第21-22页 |
| 7 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 陆地棉中脯氨酸脱氢酶基因(ProDH)的克隆 | 第23-49页 |
| 1 材料与方法 | 第23-34页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·植物材料 | 第23页 |
| ·菌种、质粒与试剂 | 第23-24页 |
| ·常用试剂和培养基 | 第24页 |
| ·引物合成 | 第24-25页 |
| ·试验方法 | 第25-34页 |
| ·陆地棉总RNA的提取 | 第25页 |
| ·RNA浓度定量与完整性检测 | 第25-26页 |
| ·普通反转录cDNA的合成 | 第26页 |
| ·目的基因全长cDNA的分离 | 第26-32页 |
| ·目的基因基因组全长的获得 | 第32-34页 |
| ·生物信息学分析 | 第34页 |
| 2 结果与分析 | 第34-47页 |
| ·ProDH基因的3’末端扩增及测序分析 | 第34-36页 |
| ·ProDH基因的5’末端扩增及测序分析 | 第36-37页 |
| ·cDNA序列全长的分离及克隆 | 第37-39页 |
| ·DNA序列全长的分离及克隆 | 第39页 |
| ·生物信息学分析 | 第39-47页 |
| ·ProDH基因的生物信息学分析 | 第39-45页 |
| ·用SignalP信号肽预测工具预测 | 第45-46页 |
| ·对ProDH编码蛋白质进行亚细胞定位预测 | 第46页 |
| ·蛋白质的二级结构预测 | 第46-47页 |
| 3. 讨论 | 第47-49页 |
| 第三章 陆地棉ProDH基因的表达模式 | 第49-55页 |
| 1 材料与方法 | 第49-51页 |
| ·实验材料的准备 | 第49-50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·引物合成 | 第50页 |
| ·陆地棉总RNA的提取 | 第50页 |
| ·RNA浓度定量与完整性检测 | 第50页 |
| ·普通反转录cDNA的合成 | 第50页 |
| ·荧光定量PCR | 第50-51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-52页 |
| ·陆地棉ProDH基因的表达模式分析 | 第51-52页 |
| ·氯化钠胁迫下的表达分析 | 第51-52页 |
| ·外施L-Proline条件下该基因的表达分析 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-55页 |
| 第四章 陆地棉ProDH基因表达产物的亚细胞定位 | 第55-61页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·菌种、质粒与试剂 | 第55-56页 |
| ·常用的试剂和培养基 | 第56页 |
| ·引物合成 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-57页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第56页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·基因枪轰击洋葱表皮细胞 | 第57页 |
| 2. 结果与分析 | 第57-59页 |
| ·ProDH基因表达产物的亚细胞定位载体的构建 | 第57-58页 |
| ·ProDH基因表达产物的亚细胞定位结果 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 陆地棉ProDH基因转基因功能验证 | 第61-69页 |
| 1 材料与方法 | 第61-64页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·菌株与质粒 | 第61页 |
| ·酶及生物试剂 | 第61页 |
| ·构建过表达载体的PCR引物 | 第61-62页 |
| ·实验方法 | 第62-64页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第62页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第62页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第62-63页 |
| ·转基因烟草植株的PCR检测 | 第63-64页 |
| 2 结果与分析 | 第64-67页 |
| ·PBI121重组载体的检测 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第65-66页 |
| ·对转基因烟草进行干旱胁迫处理 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 第六章 陆地棉ProDH基因RNAi载体的构建 | 第69-75页 |
| 1 材料与方法 | 第69-71页 |
| ·菌株与质粒 | 第69页 |
| ·酶及生物试剂 | 第69-70页 |
| ·RNAi干扰载体构建引物 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-71页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第70页 |
| ·植物RNAi干扰载体的构建 | 第70-71页 |
| 2. 结果与分析 | 第71-73页 |
| ·正义片段的插入验证结果 | 第71-72页 |
| ·反义片段插入验证结果 | 第72-73页 |
| 3. 讨论 | 第73-75页 |
| 附录一 陆地棉GO2基因的克隆以及生物信息学分析 | 第75-89页 |
| 摘要 | 第75-76页 |
| 1 材料与方法 | 第76-78页 |
| ·实验材料 | 第76-77页 |
| ·植物材料的准备 | 第76页 |
| ·菌种、质粒与试剂 | 第76页 |
| ·常用试剂和培养基 | 第76-77页 |
| ·引物合成 | 第77页 |
| ·试验方法 | 第77-78页 |
| ·陆地棉总RNA的提取 | 第77页 |
| ·RNA浓度定量与完整性检测 | 第77页 |
| ·普通反转录cDNA的合成 | 第77页 |
| ·目的基因全长cDNA的分离 | 第77-78页 |
| ·目的基因基因组全长的获得 | 第78页 |
| ·生物信息学分析 | 第78页 |
| 2 结果与分析 | 第78-87页 |
| ·GO2基因的3’末端扩增及测序分析 | 第78-79页 |
| ·cDNA序列全长的分离及克隆 | 第79-80页 |
| ·生物信息学分析 | 第80-87页 |
| ·GO2基因的生物信息学分析 | 第80-85页 |
| ·用SignalP信号肽预测工具预测 | 第85-86页 |
| ·对GO2基因编码蛋白质进行亚细胞定位预测 | 第86页 |
| ·蛋白质的二级结构预测 | 第86-87页 |
| 3. 讨论 | 第87-89页 |
| 附录二陆地棉SGAT基因的克隆以及烟草转基因 | 第89-107页 |
| 摘要 | 第89-91页 |
| 1 材料与方法 | 第91-94页 |
| ·实验材料 | 第91页 |
| ·植物材料的准备 | 第91页 |
| ·菌种、质粒与试剂 | 第91页 |
| ·常用试剂和培养基 | 第91页 |
| ·引物合成 | 第91页 |
| ·试验方法 | 第91-93页 |
| ·陆地棉总RNA的提取 | 第91-92页 |
| ·RNA浓度定量与完整性检测 | 第92页 |
| ·普通反转录cDNA的合成 | 第92页 |
| ·目的基因全长cDNA的分离 | 第92页 |
| ·目的基因基因组全长的获得 | 第92页 |
| ·生物信息学分析 | 第92页 |
| ·陆地棉SGAT基因的烟草转化 | 第92页 |
| ·菌株与质粒 | 第92-93页 |
| ·酶及生物试剂 | 第93页 |
| ·构建过表达载体的PCR引物 | 第93页 |
| ·实验方法 | 第93-94页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第93页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第93页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第93页 |
| ·转基因烟草植株的PCR检测 | 第93-94页 |
| 2 结果与分析 | 第94-104页 |
| ·SGAT基因的3’末端扩增及测序分析 | 第94-95页 |
| ·cDNA序列全长的分离及克隆 | 第95-97页 |
| ·生物信息学分析 | 第97-103页 |
| ·SGAT基因的生物信息学分析 | 第97-101页 |
| ·用SignalP信号肽预测工具预测(图2-6) | 第101-102页 |
| ·对SGAT基因编码蛋白质进行亚细胞定位预测 | 第102页 |
| ·蛋白质的二级结构预测 | 第102-103页 |
| ·PBI121重组载体的检测 | 第103页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第103-104页 |
| 3. 讨论 | 第104-107页 |
| 全文结论 | 第107-109页 |
| 创新点 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-119页 |
| 致谢 | 第119页 |