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猪肌内脂肪沉积相关基因的筛选鉴定及其特征分析

中文摘要第1-11页
Abstract第11-13页
1 引言第13-31页
   ·猪肉 IMF第13-23页
     ·IMF 的概念与组成第13-14页
     ·IMF 的合成与代谢调控第14-17页
     ·IMF 与肉质的关系第17-19页
     ·影响 IMF 的因素第19-23页
     ·影响 IMF 沉积关键基因的筛选研究第23页
   ·差异表达基因的筛选方法第23-30页
   ·本研究的目的意义第30-31页
2 材料与方法第31-70页
   ·试验材料第31-37页
     ·试验动物和样品采集第31页
     ·菌株、载体和细胞第31页
     ·主要仪器第31-32页
     ·酶和试剂第32-36页
     ·主要数据库及生物软件第36-37页
   ·试验方法第37-69页
     ·IMF 含量测定第37页
     ·总 RNA 的提取、纯化和检测第37-39页
     ·cDNA 第一条链的合成和检测第39页
     ·莱芜猪高、低 IMF 抑制性消减杂交文库的构建第39-55页
     ·莱芜猪、大白猪抑制性消减杂交文库的构建第55-61页
     ·测序与比对分析第61-62页
     ·Real-time PCR 验证差异表达基因第62-63页
     ·猪 NDUFS4 基因 cDNA 序列的克隆、mRNA 表达与生物信息学分析第63-69页
   ·统计分析第69-70页
3 结果与分析第70-100页
   ·莱芜猪高、低 IMF 含量消减文库的构建第70-73页
     ·莱芜猪高、低 IMF 含量结果第70页
     ·总 RNA 提取及 mRNA 分离第70-71页
     ·酶切结果第71页
     ·接头连接效率第71-72页
     ·两次 PCR 结果第72页
     ·消减效率的 PCR 分析第72-73页
     ·SSH 产物克隆及文库质量评价第73页
   ·高、低 IMF 莱芜猪正向消减文库 ESTs 获得与分析第73-77页
     ·斑点杂交筛选结果第73-74页
     ·ESTs 获得与分析第74-77页
     ·差异表达基因实时定量 PCR 检测第77页
   ·莱芜猪、大白猪消减文库的构建第77-81页
     ·总 RNA 提取第78页
     ·双链 cDNA(ds-cDNA)制备过程循环数的优化第78页
     ·Rsa I 酶切消化效果的鉴定第78-79页
     ·接头连接效率第79页
     ·两次 PCR 结果第79-80页
     ·消减效率的 PCR 分析第80页
     ·SSH 产物克隆及文库质量评价第80-81页
   ·莱芜猪、大白猪正反向消减文库 ESTs 获得与分析第81-88页
     ·斑点杂交筛选结果第81页
     ·ESTs 获得与分析第81-87页
     ·差异表达基因实时定量 PCR 检测第87-88页
   ·猪 NDUFS4 基因的克隆表达及生物信息学分析第88-100页
     ·猪 NDUFS4 基因 cDNA 的克隆第88-90页
     ·NDUFS4 基因的生物信息学分析第90-98页
     ·猪 NDUFS4 CDS 区突变检测第98-99页
     ·猪 NDUFS4 基因的 mRNA 组织表达谱分析第99页
     ·莱芜猪、大白猪背最长肌中 NDUFS4 基因 mRNA 表达水平的分析第99-100页
4 讨论第100-106页
   ·SSH 分析第100-101页
   ·差异表达基因的验证与分析第101-104页
     ·ADFP第101-102页
     ·ACSL1第102页
     ·ACADM第102页
     ·PDK第102-103页
     ·AMPD1第103-104页
     ·PGK1第104页
     ·其他差异表达基因第104页
   ·NDUFS4 与 IMF 沉积第104-106页
5 结论第106-107页
参考文献第107-120页
致谢第120-121页
作者简介第121页
攻读学位期间发表论文情况第121页

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