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非肌肉肌球蛋白重链Ⅱ-A在PRRSV感染细胞过程中的作用研究

中文摘要第1-14页
Abstract第14-17页
1 引言第17-40页
   ·猪繁殖与呼吸综合征概述第17-18页
   ·PRRSV 生物学特性第18-24页
     ·PRRSV 的分类地位第18页
     ·PRRSV 的形态结构第18-19页
     ·PRRSV 的基因组结构第19-24页
   ·PRRSV 免疫学与致病机制的研究进展第24-27页
     ·体液免疫反应第24-25页
     ·细胞免疫反应第25-26页
     ·PRRSV 的致病机制第26-27页
   ·病毒的细胞受体第27-31页
     ·病毒受体的概述第27-28页
     ·病毒侵入宿主细胞的过程第28-29页
     ·鉴定受体的方法第29-31页
   ·猪繁殖与呼吸综合征病毒受体的研究进展第31-40页
2 材料与方法第40-69页
   ·实验材料第40-42页
     ·细胞、毒株与抗体第40页
     ·实验动物第40页
     ·主要试剂与药品第40页
     ·载体与菌种第40-41页
     ·试剂的配制第41-42页
     ·仪器设备第42页
   ·实验方法第42-69页
     ·细胞的传代培养及 PRRSV 增殖第42-44页
     ·间接免疫荧光检测第44页
     ·目的蛋白的 SDA-PAGE 及 Western bolt 分析第44-47页
     ·实时荧光定量检测第47-54页
     ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与 PRRSV 的蛋白-病毒 pull down 分析第54-59页
     ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 抗血清对病毒的阻断分析第59-61页
     ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 低表达稳定细胞系的建立第61-65页
     ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与病毒在 Marc-145 细胞上的共定位分析第65页
     ·稳定敲低表达 NMHC-ⅡA 蛋白对 PRRSV 感染 Marc-145 细胞的影响第65-66页
     ·NMHC-ⅡA 低表达对细胞生长的影响第66-67页
     ·NMHC-ⅡA 低表达对细胞周期的影响第67-68页
     ·NMHC-ⅡA 低表达对细胞有丝分裂的影响第68-69页
3 结果与分析第69-92页
   ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与 PRRSV 的 PULL DOWN 分析第69-72页
     ·抗独特型抗体 5G2 及抗 PRRSV N 蛋白单克隆抗体 6D10 腹水制备与纯化.第69页
     ·NMHC-ⅡA 截短蛋白 PRA 的表达与纯化第69-70页
     ·抗独特型抗体 5G2 和 PRA 蛋白的免疫磁珠标记及蛋白-病毒 pull down 分析第70-72页
   ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 抗血清对病毒的阻断分析第72-74页
     ·NMHC-ⅡA 蛋白的提取第72页
     ·抗 NMHC-ⅡA 蛋白血清的采集与血清抗体效价测定第72-73页
     ·血清阻断病毒的 FFN 检测第73-74页
   ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 稳定低表达细胞系的建立第74-80页
     ·荧光定量引物扩增效率检测第74-76页
     ·miRNA 表达载体敲低 NMHC-ⅡA 效率的测定第76-77页
     ·稳定表达 miRNA 细胞系的筛选第77-79页
     ·筛选细胞系的敲低效果测定第79-80页
     ·筛选细胞系 CD163、vimentin 基因表达水平检测结果第80页
   ·稳定低表达 NMHC-ⅡA 蛋白对 PRRSV 感染的影响第80-83页
     ·稳定低表达 NMHC-ⅡA 细胞对 PRRSV 吸附的影响测定第80-82页
     ·稳定敲低 NMHC-ⅡA 表达对 PRRSV 增殖的影响测定第82-83页
   ·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与病毒在 MARC-145 细胞上的共定位分析第83-85页
   ·NMHC-ⅡA 低表达对细胞生长的影响第85-86页
     ·标准曲线的构建第85页
     ·生长曲线的测定第85-86页
   ·NMHC-ⅡA 低表达对细胞周期的影响第86-90页
     ·细胞生长的同步化第86-87页
     ·不同生长时期细胞周期分布比例分析第87-90页
   ·NMHC-ⅡA 低表达对细胞有丝分裂的影响第90-92页
4 讨论第92-95页
5 结论第95-96页
参考文献第96-107页
附录:常用溶液的配制第107-111页
致谢第111-112页
攻读学位期间发表论文情况第112页

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