中文摘要 | 第1-14页 |
Abstract | 第14-17页 |
1 引言 | 第17-40页 |
·猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第17-18页 |
·PRRSV 生物学特性 | 第18-24页 |
·PRRSV 的分类地位 | 第18页 |
·PRRSV 的形态结构 | 第18-19页 |
·PRRSV 的基因组结构 | 第19-24页 |
·PRRSV 免疫学与致病机制的研究进展 | 第24-27页 |
·体液免疫反应 | 第24-25页 |
·细胞免疫反应 | 第25-26页 |
·PRRSV 的致病机制 | 第26-27页 |
·病毒的细胞受体 | 第27-31页 |
·病毒受体的概述 | 第27-28页 |
·病毒侵入宿主细胞的过程 | 第28-29页 |
·鉴定受体的方法 | 第29-31页 |
·猪繁殖与呼吸综合征病毒受体的研究进展 | 第31-40页 |
2 材料与方法 | 第40-69页 |
·实验材料 | 第40-42页 |
·细胞、毒株与抗体 | 第40页 |
·实验动物 | 第40页 |
·主要试剂与药品 | 第40页 |
·载体与菌种 | 第40-41页 |
·试剂的配制 | 第41-42页 |
·仪器设备 | 第42页 |
·实验方法 | 第42-69页 |
·细胞的传代培养及 PRRSV 增殖 | 第42-44页 |
·间接免疫荧光检测 | 第44页 |
·目的蛋白的 SDA-PAGE 及 Western bolt 分析 | 第44-47页 |
·实时荧光定量检测 | 第47-54页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与 PRRSV 的蛋白-病毒 pull down 分析 | 第54-59页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 抗血清对病毒的阻断分析 | 第59-61页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 低表达稳定细胞系的建立 | 第61-65页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与病毒在 Marc-145 细胞上的共定位分析 | 第65页 |
·稳定敲低表达 NMHC-ⅡA 蛋白对 PRRSV 感染 Marc-145 细胞的影响 | 第65-66页 |
·NMHC-ⅡA 低表达对细胞生长的影响 | 第66-67页 |
·NMHC-ⅡA 低表达对细胞周期的影响 | 第67-68页 |
·NMHC-ⅡA 低表达对细胞有丝分裂的影响 | 第68-69页 |
3 结果与分析 | 第69-92页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与 PRRSV 的 PULL DOWN 分析 | 第69-72页 |
·抗独特型抗体 5G2 及抗 PRRSV N 蛋白单克隆抗体 6D10 腹水制备与纯化. | 第69页 |
·NMHC-ⅡA 截短蛋白 PRA 的表达与纯化 | 第69-70页 |
·抗独特型抗体 5G2 和 PRA 蛋白的免疫磁珠标记及蛋白-病毒 pull down 分析 | 第70-72页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 抗血清对病毒的阻断分析 | 第72-74页 |
·NMHC-ⅡA 蛋白的提取 | 第72页 |
·抗 NMHC-ⅡA 蛋白血清的采集与血清抗体效价测定 | 第72-73页 |
·血清阻断病毒的 FFN 检测 | 第73-74页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 稳定低表达细胞系的建立 | 第74-80页 |
·荧光定量引物扩增效率检测 | 第74-76页 |
·miRNA 表达载体敲低 NMHC-ⅡA 效率的测定 | 第76-77页 |
·稳定表达 miRNA 细胞系的筛选 | 第77-79页 |
·筛选细胞系的敲低效果测定 | 第79-80页 |
·筛选细胞系 CD163、vimentin 基因表达水平检测结果 | 第80页 |
·稳定低表达 NMHC-ⅡA 蛋白对 PRRSV 感染的影响 | 第80-83页 |
·稳定低表达 NMHC-ⅡA 细胞对 PRRSV 吸附的影响测定 | 第80-82页 |
·稳定敲低 NMHC-ⅡA 表达对 PRRSV 增殖的影响测定 | 第82-83页 |
·PRRSV 受体蛋白 NMHC-ⅡA 与病毒在 MARC-145 细胞上的共定位分析 | 第83-85页 |
·NMHC-ⅡA 低表达对细胞生长的影响 | 第85-86页 |
·标准曲线的构建 | 第85页 |
·生长曲线的测定 | 第85-86页 |
·NMHC-ⅡA 低表达对细胞周期的影响 | 第86-90页 |
·细胞生长的同步化 | 第86-87页 |
·不同生长时期细胞周期分布比例分析 | 第87-90页 |
·NMHC-ⅡA 低表达对细胞有丝分裂的影响 | 第90-92页 |
4 讨论 | 第92-95页 |
5 结论 | 第95-96页 |
参考文献 | 第96-107页 |
附录:常用溶液的配制 | 第107-111页 |
致谢 | 第111-112页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第112页 |