| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-19页 |
| 第一节 L27 结构域研究现状 | 第10-14页 |
| 第二节 Patj，Pals1 和 Mals 蛋白的研究现状 | 第14-17页 |
| ·Patj 蛋白研究现状 | 第15-16页 |
| ·Pals1 蛋白研究现状 | 第16页 |
| ·Mals2 蛋白研究现状 | 第16-17页 |
| 第三节 研究意义 | 第17-19页 |
| 第二章 主要实验原理和方法 | 第19-43页 |
| 第一节 分子克隆 | 第19-25页 |
| ·mRNA 的提取及 cDNA 的获得 | 第19-21页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第21-23页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测 | 第23页 |
| ·载体构建及阳性克隆的鉴定 | 第23-25页 |
| 第二节 大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第25-26页 |
| ·质粒扩增型感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·表达型感受态细胞 | 第25-26页 |
| 第三节 蛋白质表达纯化及鉴定 | 第26-33页 |
| ·亲和层析 | 第27-28页 |
| ·分子筛层析 | 第28-29页 |
| ·离子交换色谱 | 第29页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第29-32页 |
| ·分析型超速离心 | 第32-33页 |
| 第四节 蛋白质的结晶及蛋白质晶体的 X 射线衍射 | 第33-38页 |
| ·目前解析蛋白质三维晶体结构的方法 | 第33-34页 |
| ·蛋白质结晶的理论基础 | 第34页 |
| ·影响蛋白质结晶的因素 | 第34-35页 |
| ·蛋白质结晶的方法 | 第35-37页 |
| ·蛋白质晶体的 X 射线衍射 | 第37-38页 |
| 第五节 细胞内实验及相关实验方法 | 第38-43页 |
| ·人胚肾细胞（HEK293T）的培养 | 第38-39页 |
| ·细胞的转染及检测 | 第39-42页 |
| ·GST Pull-down 及免疫共沉淀（IP）技术 | 第42-43页 |
| 第三章 L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物构建的初步探索及晶体的优化 | 第43-70页 |
| 第一节 a-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物的构建及晶体的初步筛选 | 第43-50页 |
| ·a-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物的组成 | 第43-44页 |
| ·a-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物大规模培养 | 第44页 |
| ·a-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物的纯化及晶体的初步筛选 | 第44-50页 |
| 第二节 b-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物的构建及晶体的初步筛选 | 第50-56页 |
| 第三节 c-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物的构建及晶体的初步筛选 | 第56-61页 |
| 第四节 d-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物的构建及晶体的初步筛选 | 第61-67页 |
| 第五节 d-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物硒代甲硫氨酸蛋白的表达纯化及晶体的优化 | 第67-70页 |
| 第四章 d-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物组装 | 第70-83页 |
| 第一节 d-L27_(Patj)-(L27N-L27C)_(Pals1)-L27_(Mals2)三元复合物分子量的确定 | 第70-74页 |
| ·三元复合物的纯化 | 第70-71页 |
| ·分析型分子筛对三元复合物分子量的初步鉴定 | 第71-73页 |
| ·超速离心对三元复合物分子量的鉴定 | 第73-74页 |
| 第二节 三元复合物不同种属保守性分析 | 第74-76页 |
| ·Patj 的 L27 结构域序列保守性分析 | 第74页 |
| ·Pals1 的 L27 结构域序列保守性分析 | 第74-75页 |
| ·Mals 的 L27 结构域序列保守性分析 | 第75-76页 |
| 第三节 三元复合物的结构描述 | 第76-83页 |
| 第五章 d-L27_(Patj)-(L27N-L27C)Pals1-L27_(Mals2)三元复合物组装模式的验证 | 第83-101页 |
| 第一节 GST-Pulldown 技术研究三元复合物的组装模式 | 第83-88页 |
| ·GST-L27_(Patj)，GST-Mals2，GST 蛋白的表达纯化 | 第83-84页 |
| ·HA-GB1-L27_(Patj)和 HA-GB1-Mals2 蛋白的表达纯化 | 第84-85页 |
| ·人源 Pals1 的真核构建及表达 | 第85页 |
| ·GST-Pulldown 实验 | 第85-88页 |
| 第二节 分析型分子筛和超速离心技术研究三元复合物的组装模式 | 第88-93页 |
| ·d-L27_(Patj)-(L27N-‘TEV’-L27C)Pals1-L27_(Mals2)构建及蛋白表达纯化 | 第88-90页 |
| ·分析型分子筛研究三元复合物的组装模式 | 第90-92页 |
| ·超速离心技术研究三元复合物的组装模式 | 第92-93页 |
| 第三节：Patj/Pals1/Mals2 全长复合物的形成 | 第93-101页 |
| ·pCMV-Myc-Patj、pEGFP-N1-Pals1、pET-GST-Pals1、pcDNA4-2×Myc-Mals2质粒的构建 | 第93-97页 |
| ·GST-Pulldown 试验 | 第97-98页 |
| ·免疫共沉淀试验 | 第98-101页 |
| 第六章 L27_(DLG1)-(L27N-‘C’-L27C)CASK-L27_(Mals2)三元复合物组装模式92 | 第101-110页 |
| 第一节 DLG1 蛋白研究现状 | 第101-102页 |
| 第二节 CASK 蛋白研究现状 | 第102-103页 |
| 第三节 L27_(DLG1)/(L27N-‘C’-L27C)CASK/L27_(Mals2)三元复合物的纯化 | 第103-107页 |
| 第四节 免疫共沉淀实验 | 第107-110页 |
| 第七章 讨论 | 第110-113页 |
| 参考文献 | 第113-116页 |
| 致谢 | 第116-117页 |
| 个人简历 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第117-118页 |
