| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 中英文縮写对照表 | 第11-12页 |
| 第一章 文章综述 | 第12-19页 |
| 1 前言 | 第12-13页 |
| 2 组织特异性启动子 | 第13-14页 |
| 3 骨骼肌特异性表达基因a-actin的研究进展 | 第14-16页 |
| 4 蜕皮素诱导系统 | 第16-17页 |
| 5 研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 第二章 材料和方法 | 第19-44页 |
| 1 实验材料 | 第19-25页 |
| ·主要仪器和设备 | 第19页 |
| ·所用实验试剂 | 第19-21页 |
| ·所用载体和细胞 | 第21-23页 |
| ·常用试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·细胞培养所用试剂的配制 | 第23页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测所需试剂的配制 | 第23-24页 |
| ·主要生物学软件 | 第24-25页 |
| 2 实验方法 | 第25-44页 |
| ·调节质粒pVg-actin载体的构建方案 | 第25-32页 |
| ·载体重组的引物设计 | 第26-27页 |
| ·PCR产物的检测、回收及纯化 | 第27-28页 |
| ·PCR产物的加尾及纯化 | 第28页 |
| ·PCR产物的克隆及测序 | 第28-29页 |
| ·T-actin和T-ZP的小量提取及酶切回收 | 第29-30页 |
| ·T-actin和T-ZP的酶切鉴定及片段的回收 | 第30-31页 |
| ·T-ZP-actin的小量提取及酶切回收 | 第31页 |
| ·pVg-actin的小量提取及酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·反应质粒pIND-LacZ和pIND-MyoD载体的构建 | 第32-37页 |
| ·重组质粒pIND-LacZ的小量提取及酶切鉴定 | 第33-35页 |
| ·MyoD基因片段的扩增 | 第35-36页 |
| ·pVg-actin以及pIND-MyoD可用于细胞转染的质粒小量提取 | 第36-37页 |
| ·C2C12细胞系培养 | 第37-44页 |
| ·冻存细胞的复苏 | 第37页 |
| ·细胞的培养和传代 | 第37-38页 |
| ·细胞的冻存 | 第38页 |
| ·C2C12细胞的诱导分化 | 第38页 |
| ·G418筛选C2C12细胞的预实验 | 第38-39页 |
| ·C2C12细胞的瞬时转染 | 第39-40页 |
| ·C2C12细胞的稳定筛选 | 第40页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·细胞总蛋白浓度测定 | 第41页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性的检测 | 第41-42页 |
| ·β-半乳糖苷酶标准曲线的建立 | 第42-43页 |
| ·数据的处理及分析 | 第43-44页 |
| 第三章 结果和分析 | 第44-60页 |
| 1 猪肌肉特异性诱导表达系统的构建 | 第44-54页 |
| ·调节质粒pV-actin载体的构建 | 第44-47页 |
| ·猪α-actin启动子和ZP片段的获得 | 第44-45页 |
| ·T-actin及T-ZP的构建及酶切回收 | 第45页 |
| ·T-ZP-actin的构建及酶切回收 | 第45-46页 |
| ·pVg-actin的构建及酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·反应质粒pIND-EGFP/pIND-LacZ/pIND-MyoD载体的构建 | 第47-51页 |
| ·pIND-EGFP载体的构建和酶切鉴定 | 第47-49页 |
| ·pIND-LacZ载体的构建和酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·pIND-MyoD载体的构建和酶切鉴定 | 第50-51页 |
| ·C2C12细胞系的稳定筛选及诱导分化 | 第51-54页 |
| ·C2C12细胞的诱导分化 | 第52页 |
| ·细胞转染pVg-actin/pIND-EGFP质粒荧光检测 | 第52-53页 |
| ·阳性克隆细胞的检测 | 第53-54页 |
| 2 β-半乳糖苷酶含量检测 | 第54-58页 |
| ·pVg-actin/pIND-LacZ系统中β-GaL表达量与诱导时间的关系 | 第55-56页 |
| ·pVg-actin/pIND-LacZ系统中β-GaL表达量与诱导浓度的关系 | 第56-57页 |
| ·不同时期肌管中β-GaL表达量与诱导浓度的关系 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 3 pVg-actin/pIND-MyoD载体转染小鼠肌管在mRNA水平上的检测 | 第58-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-67页 |
| 1 β-半乳糖苷酶报告系统的作用 | 第60页 |
| 2 组织特异性启动子 | 第60-61页 |
| 3 真核表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 4 稳定转染细胞系的构建 | 第62-63页 |
| 5 MyoD基因 | 第63-64页 |
| 6 猪肌肉特异性诱导表达系统的功能验证 | 第64-67页 |
| 第五章 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 附录 | 第74-77页 |
| 附录1 α-actin启动子序列(268 bp) | 第74页 |
| 附录2 ZP上游序列(1620 bp) | 第74-75页 |
| 附录3 ZP-actin序列(1900 bp) | 第75页 |
| 附录4 MyoD序列(960 bp) | 第75-76页 |
| 附录5 EGFP序列(798bp) | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
