| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-14页 |
| 缩略语表 | 第14-16页 |
| 第1章 文献综述 | 第16-28页 |
| 1 流感病毒简介 | 第16-24页 |
| ·流感病毒分类 | 第16-17页 |
| ·流感病毒形态结构 | 第17-18页 |
| ·甲型流感病毒宿主及传播 | 第18页 |
| ·甲型H1N1/2009流感病毒的爆发流行 | 第18-21页 |
| ·感染者临床症状 | 第19页 |
| ·基因型研究 | 第19页 |
| ·H1N1/2009流感病毒的致病性 | 第19-21页 |
| ·猪流感的流行 | 第21-24页 |
| ·古典猪流感病毒 | 第22页 |
| ·类人猪流感病毒 | 第22页 |
| ·类禽猪流感病毒 | 第22-23页 |
| ·H1N2猪流感病毒 | 第23-24页 |
| ·H1N2猪流感病毒致病性 | 第24页 |
| 2 糖基化简介 | 第24-28页 |
| ·糖基化概念 | 第24-25页 |
| ·流感病毒HA的功能及与糖基化关系 | 第25-26页 |
| ·流感病毒HA上糖基化对病毒的调控 | 第26-28页 |
| 第2章 甲型H1N1流感病毒糖基化位点的改变对其毒力和致病性影响的研究 | 第28-54页 |
| 1 材料与设备 | 第28-32页 |
| ·毒株、细胞、实验动物 | 第28页 |
| ·菌株及质粒 | 第28-29页 |
| ·抗体 | 第29页 |
| ·工具酶、主要试剂 | 第29-30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE缓冲液 | 第30-31页 |
| ·Western blotting缓冲液 | 第31页 |
| ·其他试剂的配制 | 第31页 |
| ·仪器设备和实验室条件 | 第31-32页 |
| 2 试验方法 | 第32-41页 |
| ·甲型H1N1流感病毒的拯救 | 第32-35页 |
| ·病毒基因组的合成 | 第32页 |
| ·转染质粒和转染细胞的准备 | 第32页 |
| ·8质粒共转染 | 第32页 |
| ·拯救病毒的增殖 | 第32-33页 |
| ·拯救病毒血凝鉴定 | 第33页 |
| ·拯救病毒RNA的提取 | 第33页 |
| ·拯救病毒RNA的反转录 | 第33页 |
| ·拯救病毒cDNA的PCR扩增 | 第33-34页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第34-35页 |
| ·拯救病毒的测序鉴定 | 第35页 |
| ·HA糖基化位点突变毒株的拯救 | 第35-37页 |
| ·引物设计与合成 | 第35页 |
| ·定点突变 | 第35-36页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第36页 |
| ·PCR产物的DPNI酶处理(去模板) | 第36页 |
| ·酶切产物的转化 | 第36页 |
| ·阳性重组质粒的筛选与鉴定 | 第36-37页 |
| ·去内毒素方法提取质粒 | 第37页 |
| ·糖基化位点突变毒株的拯救及鉴定 | 第37页 |
| ·糖基化位点的western-bolt鉴定 | 第37-38页 |
| ·EID_(50)、TCID_(50)和增殖曲线的测定 | 第38页 |
| ·EID_(50)的测定 | 第38页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第38页 |
| ·增殖曲线测定 | 第38页 |
| ·病毒洗脱试验 | 第38-39页 |
| ·血凝抑制试验 | 第39页 |
| ·中和试验 | 第39页 |
| ·动物试验 | 第39-40页 |
| ·Real-time PCR验证病毒感染PAM后细胞因子的表达 | 第40-41页 |
| 3. 结果 | 第41-51页 |
| ·新型甲型H1N1流感病毒的拯救 | 第41页 |
| ·病毒基因组合成及病毒的拯救 | 第41页 |
| ·拯救病毒在鸡胚中的传代 | 第41页 |
| ·拯救病毒的测序鉴定 | 第41页 |
| ·HA糖基化位点突变病毒的拯救 | 第41-42页 |
| ·糖基化位点突变的HA基因的扩增 | 第41页 |
| ·PCR产物的DpnI酶处理 | 第41页 |
| ·阳性克隆质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·定点突变的测序鉴定 | 第42页 |
| ·定点突变病毒的拯救 | 第42页 |
| ·2009H1N1与季节性及猪H1N1流感病毒糖基化位点比较 | 第42-44页 |
| ·糖基化的western-blot验证 | 第44页 |
| ·血凝价、EID_(50)和TCID_(50) | 第44-45页 |
| ·病毒增殖曲线 | 第45-46页 |
| ·病毒洗脱试验 | 第46页 |
| ·病毒与单抗的血凝抑制和微量中和试验 | 第46-47页 |
| ·感染小鼠体重变化和肺脏病毒含量 | 第47-48页 |
| ·感染小鼠肺脏抗病毒和致炎因子变化 | 第48-49页 |
| ·感染小鼠肺脏组织病理学研究 | 第49-51页 |
| ·突变位点晶体结构分析 | 第51页 |
| 4. 讨论 | 第51-54页 |
| ·糖基化位点改变对甲型H1N1流感病毒毒力和致病性的影响 | 第52页 |
| ·糖基化位点改变对甲型H1N1流感病毒抗原性的改变 | 第52-53页 |
| ·糖基化位点突变毒株诱导细胞因子表达的变化 | 第53-54页 |
| 第3章 H1N2猪流感病毒基因型分析及其对小鼠的致病性和炎性反应 | 第54-66页 |
| 1. 试验材料 | 第54-55页 |
| ·毒株、细胞、实验动物 | 第54页 |
| ·主要试剂 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-55页 |
| ·其他试剂的配制 | 第55页 |
| ·仪器设备和实验室条件 | 第55页 |
| 2. 试验方法 | 第55-57页 |
| ·血凝价、EID_(50)、TCID_(50)测定方法 | 第55页 |
| ·鸡胚平均死亡时间(MDT)试验 | 第55页 |
| ·小鼠半数致死量(MLD_(50))试验 | 第55-56页 |
| ·流感病毒片段序列进化分析 | 第56页 |
| ·动物试验 | 第56页 |
| ·感染小鼠肺脏病毒滴度和直肠排毒检测 | 第56页 |
| ·Real-time PCR验证病毒感染PAM后细胞因子的表达 | 第56-57页 |
| 3 结果与分析 | 第57-64页 |
| ·H1N2猪流感病毒基因型分析 | 第57-60页 |
| ·HB/04和HB/05的生物学特性 | 第60页 |
| ·H1N2猪流感病毒在小鼠体内的生物学特性 | 第60-62页 |
| ·HB/04和HB/05诱导的抗病毒和炎性反应 | 第62-63页 |
| ·感染小鼠肺脏组织病理学研究 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| ·H1N2猪流感病毒分型 | 第64-65页 |
| ·H1N2猪流感病毒对小鼠的致病性 | 第65-66页 |
| 总结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 附录 | 第79页 |
