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趋磁细菌Magnetospirillum magneticumAMB-1反硝化代谢与DNA损伤修复体系对磁小体合成及其遗传稳定性的影响研究

摘要第1-13页
ABSTRACT第13-17页
缩略词表(ABBREVIATION)第17-19页
第一章 绪论第19-54页
   ·趋磁细菌的分类与生态学特性第19-23页
     ·趋磁细菌的形态多样性和物种多样性第19-22页
     ·趋磁细菌的生态分布第22-23页
   ·趋磁细菌的趋磁特性第23-26页
   ·磁小体第26-29页
     ·磁小体形态第26-27页
     ·磁小体的结构第27-29页
       ·磁小体晶核结构第27页
       ·磁小体膜第27-29页
   ·磁小体合成过程与控制机制第29-41页
     ·磁小体合成的遗传学基础第29-35页
       ·磁小体岛第30-32页
       ·磁小体岛上的重要产磁相关基因第32-35页
     ·铁源的吸收与转运第35-36页
     ·磁小体囊泡的发生第36-38页
     ·磁小体的空间定位及成链过程第38-40页
     ·磁小体的生物矿化及晶核成熟过程第40-41页
   ·趋磁细菌生理学第41-48页
     ·趋磁细菌代谢类型第41-42页
     ·氧代谢第42-43页
     ·氮代谢第43-47页
     ·铁代谢第47-48页
   ·趋磁细菌的应用第48-52页
     ·趋磁细菌的研究意义第48-49页
     ·磁小体的应用第49-52页
   ·论文的立项依据以及研究内容第52-54页
第二章 趋磁细菌AMB-1生长特性研究第54-64页
   ·材料与方法第54-59页
     ·主要仪器和试剂、菌种第54-55页
     ·培养基第55-56页
     ·趋磁细菌AMB-1培养条件第56-57页
     ·菌体生长量测定第57页
     ·菌体磁小体合成能力测定第57页
     ·趋磁细菌AMB-1显微观察第57-58页
     ·趋磁细菌AMB-1的菌种保藏第58页
     ·毛细管磁分离进行菌种复壮第58-59页
   ·结果与分析第59-62页
     ·AMB-1的静置培养第59页
     ·AMB-1的好氧培养第59-60页
     ·AMB-1的厌氧发酵培养第60页
     ·AMB-1的恒定通氧培养第60-62页
   ·小结与讨论第62-64页
第三章 趋磁细菌AMB-1反硝化途径相关基因功能分析以及其与磁小体合成关系的研究第64-114页
   ·材料与方法第64-79页
     ·主要仪器与试剂第64-66页
     ·菌种、质粒以及引物序列第66-68页
     ·趋磁细菌AMB-1厌氧代谢途径组分的生物信息学分析第68页
     ·酶活的体外测定方法第68-71页
       ·Nir的细胞色素C氧化酶活性测定第68-69页
       ·Nir的TMPD氧化酶活性测定第69-70页
       ·Nir的TMPD-NO_2~-氧化还原酶活性测定第70-71页
       ·Nar相关酶活性的测量方法第71页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nir组分的纯化及鉴定第71-72页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nir的异源表达及纯化第72-75页
       ·趋磁细菌AMB-1 Nir的基因克隆以及异源表达第72-74页
       ·趋磁细菌AMB-1 Nir重组蛋白的纯化第74-75页
     ·趋磁细菌AMB-1目的基因转录水平分析第75-77页
       ·总RNA提取第75-76页
       ·RNA反转录生成cDNA第76页
       ·荧光定量PCR转录分析第76-77页
     ·趋磁细菌AMB-1功能基因的插入失活第77-78页
     ·趋磁细菌AMB-1基因插入失活突变株的验证第78页
       ·分子生物学验证第78页
       ·表型验证第78页
     ·趋磁细菌AMB-1生长过程中铁源吸收水平的测定第78-79页
   ·结果与分析第79-109页
     ·趋磁细菌AMB-1厌氧代谢途径组分的生物信息学分析第79-84页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nir蛋白的酶活测定第84-90页
       ·Nir的细胞色素C氧化酶活性测定第84-87页
       ·Nir的TMPD-O_2氧化还原酶活性测定第87-88页
       ·Nir的TMPD-NO_2~-氧化还原酶活性测定第88-90页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nir的分离纯化和鉴定第90-94页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nir组分的异源表达及纯化第94-96页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nir蛋白在磁小体合成过程中的表现第96-99页
       ·趋磁细菌AMB-1 Nir蛋白在磁小体合成阶段活性上升第97-98页
       ·趋磁细菌AMB-1 nir基因静置条件转录水平高于振荡条件第98-99页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nir蛋白编码基因插入失活以及验证第99-101页
       ·nir基因失活导致AMB07 TMPD-NO_2~-还原酶活性基本丧失第100页
       ·nir基因失活不影响AMB-1生长与磁小体合成能力第100-101页
       ·AMB07 Nir蛋白同工酶基因的转录水平分析第101页
     ·反硝化途径能够支持趋磁细菌AMB-1在厌氧条件下的生长产磁第101-104页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nar蛋白体外酶活测定第104-105页
     ·趋磁细菌AMB-1 Nar蛋白编码基因的插入失活以及表型验证第105-107页
       ·Nar功能失活使AMB08的硝酸盐还原酶酶活基本丧失第106页
       ·Nar功能失活使AMB08厌氧条件下生长产磁能力受到抑制第106-107页
     ·趋磁细菌AMB-1生长过程中铁吸收测定方法的建立第107-108页
     ·Nar功能失活对菌体铁源吸收和磁小体合成没有明显影响第108-109页
   ·小结与讨论第109-114页
第四章 趋磁细菌AMB-1DNA损伤修复基因在磁小体合成中的作用第114-143页
   ·材料与方法第115-126页
     ·主要仪器和试剂第115-116页
     ·菌种、质粒以及引物序列第116-118页
     ·转座诱变以及表型异常突变株的筛选第118页
     ·表型异常突变株的鉴定以及验证第118-123页
       ·PCR验证磁小体岛完整性第118页
       ·质粒拯救鉴定转座插入位点第118页
       ·Southern Blot验证第118-123页
     ·AMB02功能失活基因的回补第123-124页
     ·DNA损伤修复基因uvrA以及重组酶基因recA的敲除第124页
     ·基因缺失突变株的表型验证第124-126页
       ·PCR验证第124页
       ·生长以及磁小体合成能力验证第124页
       ·H_2O_2抗逆性水平验证第124页
       ·透射电子显微镜检测产磁菌体数目以及菌体平均磁小体数目第124-125页
       ·磁小体岛稳定性验证第125页
       ·重组酶编码基因转录水平验证第125页
       ·重组酶体内活性水平测定第125-126页
   ·结果与分析第126-140页
     ·转座诱变筛选AMB-1突变株第126-127页
     ·转座突变株AMB02的质粒拯救以及分子生物学验证第127-129页
     ·DNA损伤修复基因uvrA的插入失活以及突变株的研究第129-140页
       ·生长以及磁小体合成能力验证第130-132页
       ·uvrA的插入失活使菌体的H_2O_2抗逆性明显降低第132-133页
       ·氧气对uvrA插入失活突变株的产磁能力造成损伤第133-134页
       ·uvrA插入失活突变株在好氧条件下磁小体岛稳定性降低第134-136页
       ·uvrA插入失活突变株体内重组酶基因转录水平升高第136-137页
       ·recA失活能够部分消除uvrA缺失对磁小体岛稳定性的影响第137-140页
   ·小结与讨论第140-143页
全文总结第143-146页
参考文献第146-153页
致谢第153-155页
攻读学位期间发表的学术论文第155-156页
外文写作一第156-176页
外文写作二第176-192页
附件第192页

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