超嗜热古菌Thermococcus siculi HJ21高温酸性α-淀粉酶基因的定向改造
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| ·酶的定向进化 | 第7-10页 |
| ·建立突变库的策略 | 第7-9页 |
| ·突变库的筛选 | 第9页 |
| ·定点突变技术在α-淀粉酶定向进化中的应用 | 第9-10页 |
| ·α-淀粉酶的种类 | 第10-11页 |
| ·耐高温α-淀粉酶 | 第10-11页 |
| ·酸性α-淀粉酶 | 第11页 |
| ·α-淀粉酶的结构特征与催化机制 | 第11-13页 |
| ·α-淀粉酶的分子结构 | 第11-12页 |
| ·α-淀粉酶的催化机制 | 第12-13页 |
| ·α-淀粉酶研究进展 | 第13页 |
| ·耐高温α-淀粉酶的工业应用及存在的问题 | 第13-14页 |
| ·立题背景及研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-19页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·菌株与质粒 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·试剂盒 | 第15页 |
| ·酶与试剂 | 第15-16页 |
| ·主要仪器与设备 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-19页 |
| ·突变位点的确定 | 第16页 |
| ·模板质粒的提取及操作 | 第16页 |
| ·定点突变 | 第16-17页 |
| ·阳性克隆的筛选、鉴定与测序 | 第17页 |
| ·酶的表达 | 第17页 |
| ·α-淀粉酶活力的测定 | 第17页 |
| ·温度对酶活力的影响 | 第17页 |
| ·pH 对酶活力的影响 | 第17页 |
| ·结构比较与分析 | 第17-18页 |
| ·活性位点预测 | 第18页 |
| ·突变株的遗传稳定性 | 第18-19页 |
| 第三章 结果与分析 | 第19-30页 |
| ·确定酶的拟突变位点 | 第19-20页 |
| ·定点饱和突变引物的设计 | 第20-21页 |
| ·单点突变株α-淀粉酶活力 | 第21页 |
| ·多点突变株α-淀粉酶活力 | 第21-22页 |
| ·TSA 与突变子TSAM-23 的酶学性质比较 | 第22-26页 |
| ·温度对酶活力的影响 | 第22-23页 |
| ·酶的热稳定性 | 第23-24页 |
| ·pH 对酶活力的影响 | 第24-25页 |
| ·酶的pH 稳定性 | 第25-26页 |
| ·结构比较与分析 | 第26-28页 |
| ·TSAM-23 的一级结构及理化性质分析 | 第26页 |
| ·TSAM-23 的二级结构分析 | 第26-27页 |
| ·TSAM-23 的三维建模及空间结构预测 | 第27-28页 |
| ·突变株的遗传稳定性 | 第28-29页 |
| ·质粒稳定性 | 第28-29页 |
| ·突变株各代细胞表达目的产物的稳定性 | 第29页 |
| ·活性位点预测结果 | 第29-30页 |
| 结论与展望 | 第30-31页 |
| 一、主要结论 | 第30页 |
| 二、存在的问题 | 第30页 |
| 三、展望 | 第30-31页 |
| 致谢 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-39页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第39页 |
