| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 论文 | 第13-65页 |
| 第一章 杂合抗菌肽基因的设计、合成及真核表达载体构建 | 第13-29页 |
| 1 材料和方法 | 第13-23页 |
| ·材料 | 第13-16页 |
| ·菌种 | 第13页 |
| ·酶制剂和试剂盒 | 第13-14页 |
| ·试剂 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15页 |
| ·仪器 | 第15-16页 |
| ·引物及测序 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-23页 |
| ·杂合抗菌肽的序列设计 | 第16页 |
| ·杂合抗菌肽的生物信息学分析 | 第16页 |
| ·杂合抗菌肽的基因改造 | 第16-18页 |
| ·杂合抗菌肽基因的克隆 | 第18-21页 |
| ·杂合抗菌肽真核表达载体的构建 | 第21-23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-26页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第23-24页 |
| ·杂合抗菌肽的基本性质分析 | 第23页 |
| ·杂合抗菌肽的二级结构分析 | 第23-24页 |
| ·杂合抗菌肽的静电荷分析 | 第24页 |
| ·重叠PCR的电泳验证 | 第24-25页 |
| ·T-A克隆的酶切验证及测序 | 第25页 |
| ·真核表达载体的酶切验证及测序 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-29页 |
| ·杂合抗菌肽的生物信息学分析 | 第26页 |
| ·杂合抗菌肽基因的改造 | 第26-27页 |
| ·小片段的高效胶回收 | 第27页 |
| ·表达系统的可行性讨论 | 第27-28页 |
| ·小片段的高效连接 | 第28-29页 |
| 第二章 杂合抗菌肽的真核表达及条件优化 | 第29-52页 |
| 1 材料和方法 | 第29-38页 |
| ·材料 | 第29-32页 |
| ·菌种 | 第29页 |
| ·酶制剂 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-31页 |
| ·培养基 | 第31-32页 |
| ·仪器 | 第32页 |
| ·引物及测序 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-38页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第32-34页 |
| ·电转化条件优化 | 第34-35页 |
| ·重组杂合肽的表达 | 第35-37页 |
| ·表达条件优化 | 第37-38页 |
| ·质粒稳定性测定 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-48页 |
| ·酵母重组子的PCR验证 | 第38-39页 |
| ·酵母电转化优化 | 第39-42页 |
| ·P.pastorisX-33生长曲线的测定 | 第39-40页 |
| ·P.pastorisX-33死亡率的测定 | 第40页 |
| ·电转条件优化 | 第40-42页 |
| ·杂合抗菌肽的表达 | 第42-43页 |
| ·小肽SDS-PAGE凝胶电泳分析 | 第42页 |
| ·粗蛋白的浓度测定 | 第42-43页 |
| ·杂合抗菌肽的表达条件的优化 | 第43-46页 |
| ·重组酵母菌的生长动力学 | 第43-44页 |
| ·诱导时间 | 第44页 |
| ·诱导初始OD600值 | 第44-45页 |
| ·诱导剂浓度 | 第45页 |
| ·培养基pH | 第45-46页 |
| ·诱导温度 | 第46页 |
| ·质粒稳定性测定 | 第46-48页 |
| ·选择性平板实验 | 第46-48页 |
| ·PCR实验 | 第48页 |
| 3 讨论 | 第48-52页 |
| ·酵母DNA的快速分离 | 第48-49页 |
| ·转化条件的优化 | 第49页 |
| ·小肽SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第49-50页 |
| ·表达条件优化 | 第50页 |
| ·质粒稳定性 | 第50-52页 |
| 第三章 杂合抗菌肽的性质研究 | 第52-65页 |
| 1 材料和方法 | 第52-56页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·菌种 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| ·培养基 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52-53页 |
| ·实验动物 | 第53页 |
| ·方法 | 第53-56页 |
| ·活性初步测定 | 第53页 |
| ·最小抑菌浓度(MIC)测定 | 第53页 |
| ·效价测定 | 第53页 |
| ·热稳定性检测 | 第53-54页 |
| ·酸碱稳定性检测 | 第54页 |
| ·抗菌谱测定 | 第54页 |
| ·溶血性体外检测 | 第54-55页 |
| ·溶血性体内检测 | 第55-56页 |
| 2 结果与分析 | 第56-62页 |
| ·活性初步测定 | 第56-57页 |
| ·最小抑菌浓度(MIC)测定 | 第57页 |
| ·效价测定 | 第57-58页 |
| ·热稳定性检测 | 第58页 |
| ·酸碱稳定性检测 | 第58-59页 |
| ·抗菌谱测定 | 第59-60页 |
| ·溶血性体外检测 | 第60-61页 |
| ·溶血性体内检测 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-65页 |
| ·活性与抗菌谱 | 第62-63页 |
| ·杂合肽的稳定性 | 第63页 |
| ·活性与结构的关系 | 第63页 |
| ·溶血性分析 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-68页 |
| 在读期间科研成果 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 综述 | 第71-83页 |