油菜黑芥子酶基因的大肠杆菌工程菌构建和表达研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第1章 引言 | 第9-22页 |
| ·黑芥子酶的研究进展 | 第9-15页 |
| ·黑芥子酶概述 | 第9-10页 |
| ·黑芥子酶的作用机制 | 第10-11页 |
| ·黑芥子酶的稳定性 | 第11-12页 |
| ·黑芥子酶的提取研究 | 第12-13页 |
| ·黑芥子酶活性的检测方法 | 第13-14页 |
| ·油菜中黑芥子酶的分子生物学 | 第14-15页 |
| ·黑芥子酶的基因工程 | 第15页 |
| ·pGEX表达载体系统 | 第15-20页 |
| ·pGEX表达系统概述 | 第15-17页 |
| ·用pGEX载体表达外源蛋白 | 第17-18页 |
| ·pGEX载体的表达条件及纯化条件 | 第18-19页 |
| ·pGEX载体在基因克隆中的应用 | 第19-20页 |
| ·实验设计方案 | 第20-22页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第20页 |
| ·本研究的主要内容 | 第20-21页 |
| ·实验流程图 | 第21-22页 |
| 第2章 黑芥子酶MYR1基因的克隆及测序 | 第22-32页 |
| 前言 | 第22页 |
| ·材料和方法 | 第22-27页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·方法 | 第23-27页 |
| ·结果 | 第27-31页 |
| ·总RNA电泳图 | 第27页 |
| ·RT-PCR扩增的黑芥子酶基因 | 第27-28页 |
| ·基因的克隆和测序 | 第28-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第3章 重组子的构建、筛选和鉴定 | 第32-47页 |
| 前言 | 第32页 |
| ·材料和方法 | 第32-38页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-38页 |
| ·结果 | 第38-45页 |
| ·黑芥子酶基因MYR1的分离纯化 | 第38-40页 |
| ·表达载体pGEX-4T-1质粒的提取纯化 | 第40-42页 |
| ·重组质粒pGEX-4T-1-MYR1的构建 | 第42-43页 |
| ·表达载体pGEX-4T-1-MYR1的鉴定 | 第43-45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第4章 融合蛋白的结构分析、表达和活性测定 | 第47-62页 |
| 前言 | 第47页 |
| ·材料和方法 | 第47-53页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-53页 |
| ·结果 | 第53-60页 |
| ·融合蛋白一级结构的确定 | 第53-55页 |
| ·融合蛋白与甘蓝油菜中黑芥子酶的空间结构对比 | 第55-56页 |
| ·生长曲线图 | 第56页 |
| ·破碎条件 | 第56-57页 |
| ·基因工程菌培养条件优化 | 第57-58页 |
| ·酶活性分析 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录1 缩略词表 | 第70-71页 |
| 附录2 酶及抗生素的配制 | 第71-72页 |
| 附录3 部分试剂的配制 | 第72-73页 |
| 附录4 培养基的配制 | 第73-74页 |
| 附录5 DNA同源性比较 | 第74-76页 |
| 附录6 氨基酸同源性比较 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
