| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-41页 |
| 1 O-GlcNAc的生物合成 | 第16-27页 |
| ·O-GlcNAc糖基转移酶（OGT） | 第22-24页 |
| ·O-GlcNAc糖苷酶（OGA） | 第24-26页 |
| ·己糖生物合成途径（HBP） | 第26-27页 |
| 2 O-GlcNAc的检测方法 | 第27-29页 |
| ·半乳糖基转移酶法检测末端O-GlcNAc | 第27-28页 |
| ·植物凝集素法检测末端O-GlcNAc | 第28页 |
| ·抗体法检测末端O-GlcNAc | 第28页 |
| ·化学方法检测末端O-GlcNAc | 第28-29页 |
| ·QUIC-Tag法检测末端O-GlcNAc | 第29页 |
| 3 O-GlcNAc与磷酸化的关系 | 第29-32页 |
| 4 O-GlcNAc对蛋白质功能的调节 | 第32-34页 |
| ·转录调节 | 第32-33页 |
| ·蛋白质的降解 | 第33页 |
| ·蛋白质的定位 | 第33-34页 |
| ·蛋白质的相互作用 | 第34页 |
| 5 O-GlcNAc与信号转导 | 第34-35页 |
| 6 O-GlcNAc的生物学功能 | 第35-38页 |
| ·O-GlcNAc与细胞生存 | 第35-36页 |
| ·O-GlcNAc与细胞周期 | 第36页 |
| ·O-GlcNAc与细胞营养感应 | 第36-37页 |
| ·O-GlcNAc与细胞压力 | 第37-38页 |
| 7 O-GlcNAc与疾病 | 第38-41页 |
| ·O-GlcNAc与糖尿病 | 第38页 |
| ·O-GlcNAc与神经退行性疾病 | 第38-39页 |
| ·O-GlcNAc与肿瘤 | 第39-41页 |
| 第二章 O-GlcNAc在乳腺癌转移过程中的作用 | 第41-70页 |
| 第一节 O-GlcNAc抑制和升高乳腺癌细胞模型的建立 | 第42-59页 |
| 1 实验材料 | 第42-46页 |
| ·细胞株 | 第42页 |
| ·菌种和载体 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-44页 |
| ·主要试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·主要仪器 | 第45-46页 |
| 2 实验方法 | 第46-53页 |
| ·小鼠 OGT shRNA 载体的构建 | 第46-50页 |
| ·小鼠 OGT shRNA 干扰片段的设计 | 第47-48页 |
| ·DNA 寡核苷酸片段的退火 | 第48页 |
| ·碱裂解法制备质粒 DNA | 第48-49页 |
| ·pLKO.1-puro 质粒的双酶切 | 第49页 |
| ·目的 DNA 片段的回收 | 第49页 |
| ·连接 | 第49页 |
| ·转化 | 第49-50页 |
| ·阳性克隆的筛选鉴定 | 第50页 |
| ·OGT 基因沉默乳腺癌细胞株的构建 | 第50-53页 |
| ·细胞培养 | 第50-51页 |
| ·慢病毒的制备 | 第51页 |
| ·慢病毒感染和细胞筛选实验 | 第51页 |
| ·总 RNA 的制备（Trizol 法） | 第51-52页 |
| ·反转录 PCR（RT-PCR）制备cDNA | 第52页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第52页 |
| ·免疫印迹（Western blotting，WB） | 第52-53页 |
| ·乳腺癌细胞中 OGA 活性的抑制 | 第53页 |
| 3 实验结果 | 第53-58页 |
| ·OGT 基因沉默载体的构建 | 第53-54页 |
| ·OGT 基因沉默细胞株的构建 | 第54页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测 OGT 的表达量 | 第54-56页 |
| ·WB 检测 OGT 的表达量 | 第56-57页 |
| ·OGT 沉默对 O-GlcNAc 的影响 | 第57页 |
| ·PUGNAC 处理对 O-GlcNAc 的影响 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58页 |
| 5 讨论 | 第58-59页 |
| 第二节 O-GlcNAc 在乳腺癌发生和发展过程中的作用 | 第59-70页 |
| 1 实验材料 | 第59-60页 |
| ·细胞株 | 第59页 |
| ·实验动物 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-62页 |
| ·MTT 法检测细胞增殖 | 第60页 |
| ·细胞计数法检测细胞生长曲线 | 第60页 |
| ·细胞锚定非依赖性生长实验 | 第60-61页 |
| ·细胞迁移实验 | 第61页 |
| ·体内肿瘤形成和转移实验 | 第61页 |
| ·数据分析 | 第61-62页 |
| 3 实验结果 | 第62-67页 |
| ·O-GlcNAc 对乳腺癌细胞增殖的影响 | 第62-63页 |
| ·O-GlcNAc 对乳腺癌细胞锚定非依赖性生长能力的影响 | 第63-64页 |
| ·O-GlcNAc 对乳腺癌细胞迁移能力的影响 | 第64-66页 |
| ·O-GlcNAc对乳腺癌细胞肿瘤形成能力的影响 | 第66页 |
| ·O-GlcNAc对乳腺癌肺转移的影响 | 第66-67页 |
| 4 小结 | 第67页 |
| 5 讨论 | 第67-70页 |
| 第三章 E-cadherin 在O-GlcNAc 介导的乳腺癌迁移过程中的作用 | 第70-101页 |
| 第一节 O-GlcNAc 对E-cadherin 表达和分布的影响 | 第72-88页 |
| 1 实验材料 | 第72-73页 |
| ·细胞株 | 第72-73页 |
| ·主要试剂 | 第73页 |
| ·载体 | 第73页 |
| ·主要仪器 | 第73页 |
| 2 实验方法 | 第73-76页 |
| ·细胞间黏附能力的检测 | 第73-74页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第74页 |
| ·蛋白稳定性实验 | 第74页 |
| ·细胞骨架结合蛋白的提取 | 第74页 |
| ·细胞膜蛋白的提取 | 第74页 |
| ·免疫沉淀和免疫印迹 | 第74-75页 |
| ·sWGA-agarose 亲和沉淀糖基化蛋白 | 第75页 |
| ·激光共聚焦显微镜分析实验 | 第75页 |
| ·数据分析 | 第75-76页 |
| 3 实验结果 | 第76-86页 |
| ·O-GlcNAc 对乳腺癌细胞间黏附的影响 | 第76页 |
| ·O-GlcNAc 对 E-cadherin 和β-catenin 表达的影响 | 第76-77页 |
| ·O-GlcNAc 对 E-cadherin 和β-catenin 膜分布的影响 | 第77-79页 |
| ·O-GlcNAc 对细胞骨架结合的 E-cadherin 和β-catenin 的影响 | 第79页 |
| ·O-GlcNAc 对 E-cadherin 转录的影响 | 第79-81页 |
| ·O-GlcNAc 对 E-cadherin 蛋白稳定性的影响 | 第81-82页 |
| ·O-GlcNAc 对 E-cadherin 和β-catenin 相互作用的影响 | 第82-83页 |
| ·O-GlcNAc 对 E-cadherinβ-catenin 和p120 的修饰 | 第83-86页 |
| 4 小结 | 第86页 |
| 5 讨论 | 第86-88页 |
| 第二节 E-cadherin 在O-GlcNAc 促进乳腺癌细胞迁移过程中的作用 | 第88-101页 |
| 1 实验材料 | 第88页 |
| ·细胞株 | 第88页 |
| ·主要试剂 | 第88页 |
| ·载体 | 第88页 |
| 2 实验方法 | 第88-90页 |
| ·载体的构建 | 第88-90页 |
| ·细胞株的构建 | 第90页 |
| ·免疫印迹实验 | 第90页 |
| ·细胞迁移实验 | 第90页 |
| 3 实验结果 | 第90-99页 |
| ·pLKO.1-hygro 载体的构建 | 第90-91页 |
| ·小鼠E-cadherin shRNA表达载体的构建 | 第91-92页 |
| ·E-cadherin 沉默细胞株的构建 | 第92-93页 |
| ·OGT 基因和 E-cadherin 基因双沉默细胞株的构建 | 第93-94页 |
| ·E-cadherin 沉默对乳腺癌细胞迁移的影响 | 第94-95页 |
| ·E-cadherin 在 O-GlcNAc 介导的乳腺癌细胞迁移过程中的作用 | 第95-97页 |
| ·E-cadherin 在 O-GlcNAc 介导的乳腺癌细胞转移过程中的作用 | 第97-99页 |
| 4 小结 | 第99页 |
| 5 讨论 | 第99-101页 |
| 第四章 MAPK 信号在O-GlcNAc 介导的乳腺癌细胞迁移过程中的作用 | 第101-109页 |
| 1 实验材料 | 第102页 |
| ·细胞株 | 第102页 |
| ·主要试剂 | 第102页 |
| ·主要仪器 | 第102页 |
| 2 实验方法 | 第102-104页 |
| ·MAPK 活性（磷酸化）的检测 | 第102-103页 |
| ·PD98059 对 MAPK 活性抑制实验 | 第103页 |
| ·PD98059 对细胞迁移的影响 | 第103页 |
| ·WB检测MAPK通路对E-cadherin表达的影响 | 第103页 |
| ·免疫荧光检测 MAPK 通路对 E-cadherin 表达和分布的影响 | 第103-104页 |
| 3 实验结果 | 第104-107页 |
| ·O-GlcNAc 对 MAPK 信号的调节作用 | 第104页 |
| ·MAPK 通路在 O-GlcNAc 介导的乳腺癌细胞迁移过程中的作用 | 第104-105页 |
| ·MAPK 通路与 E-cadherin 的相互影响 | 第105-107页 |
| 4 小结 | 第107页 |
| 5 讨论 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-128页 |
| 结论与创新 | 第128-129页 |
| 缩略词 | 第129-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 发表的学术论文 | 第131页 |
