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少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)捕食线虫生化机制研究

摘要第1-5页
Abstract第5-18页
第一章 文献综述第18-46页
 1 杀线虫性真菌的分类第19-20页
 2 杀线虫性真菌的研究历史第20-25页
 3 捕食线虫性真菌对寄主线虫的作用机制第25-33页
   ·捕食器的形成过程与机理第26-28页
   ·捕食线虫性真菌对线虫的吸引第28-29页
   ·捕食线虫性真菌对线虫的识别与黏附第29-32页
   ·捕食线虫性真菌对线虫的侵染和消解第32-33页
 4 杀线虫真菌活性代谢物第33-40页
   ·杀线虫真菌活性代谢物第34-38页
     ·担子菌及其杀线虫活性代谢物第34-35页
     ·子囊菌及其杀线虫活性代谢物第35-36页
     ·半知菌及其杀线虫活性代谢物第36-37页
     ·无孢菌及其杀线虫活性代谢物第37页
     ·接合菌及其杀线虫活性代谢物第37-38页
   ·产毒真菌活性代谢物研究方向第38-40页
     ·供试线虫的选择第38页
     ·筛选的范围扩大第38-39页
     ·低分子量毒素第39页
     ·高分子量毒素第39页
     ·相关研究进展第39-40页
 5 捕食线虫性真菌分子生物学研究第40-43页
   ·捕食线虫性真菌分子系统学第40-41页
   ·捕食线虫性真菌相关基因克隆第41-43页
     ·侵染线虫相关基因的克隆第41页
     ·捕食器相关基因的克隆第41-43页
 6 捕食线虫性真菌在线虫生物防治中的应用模式第43-44页
 7 动物寄生性线虫生物控制未来研究方向及本研究的目的和意义第44-46页
第二章 试验研究第46-143页
 试验一 少孢节丛孢菌捕食线虫过程的研究第46-61页
  1 材料与方法第47-51页
   ·材料第47-48页
     ·主要试验仪器第47页
     ·主要化学试剂第47页
     ·虫种与菌种来源第47页
     ·主要溶液配制第47页
     ·主要培养基制备第47-48页
   ·方法第48-51页
     ·秀丽新杆线虫培养与收集第48页
     ·捕食过程染色镜检观察第48-49页
     ·捕食过程组织切片观察第49-50页
     ·捕食过程扫描电镜观察第50页
     ·捕食过程透射电镜观察第50-51页
  2 结果第51-58页
   ·普通光镜下少孢节丛孢菌对线虫捕食过程的观察第51-53页
   ·不同染料染色结果第53页
   ·少孢节丛孢菌捕食线虫组织切片观察结果第53-56页
   ·少孢节丛孢菌捕食线虫扫描电镜观察结果第56-57页
   ·少孢节丛孢菌捕食线虫透射电镜观察结果第57-58页
  3 讨论第58-60页
  4 小结第60-61页
 试验二 不同碳氮源及其比例和培养基初始PH 值对少孢节丛孢菌生长的影响第61-71页
  1 材料和方法第61-64页
   ·材料第61-62页
     ·主要实验设备第61-62页
     ·主要实验药品第62页
     ·捕食线虫性真菌菌株第62页
   ·方法第62-64页
     ·不同培养基的制备第62-63页
     ·少孢节丛孢菌转接培养第63页
     ·菌丝的接种和培养第63页
     ·液体培养基中菌丝的收集和称重第63页
     ·数据的处理第63-64页
  2 结果第64-69页
   ·不同碳源对少孢节丛孢菌菌丝生长的影响第64-65页
   ·不同氮源对少孢节丛孢菌菌丝生长的影响第65页
   ·不同碳氮比值对少孢节丛孢菌菌丝生长的影响第65-67页
   ·不同初始PH 值对少孢节丛孢菌菌丝生长的影响第67-69页
  3 讨论第69-70页
  4 小结第70-71页
 试验三 氨基酸对少孢节丛孢菌生长和捕食器产生影响研究第71-83页
  1 材料与方法第71-73页
   ·材料第71-72页
   ·方法第72-73页
     ·溶液配制和线虫幼虫培养第72页
     ·氨基酸对少孢节丛孢菌生长率及捕食器产生的影响第72页
     ·氨基酸诱导的少孢节丛孢菌捕食器对线虫幼虫的捕食作用第72-73页
  2 结果第73-80页
   ·氨基酸对菌丝生长率及捕食器产生的影响第73-79页
     ·氨基酸对菌丝生长率的影响第73-75页
     ·氨基酸对菌丝生长初期捕食器产生的影响第75-77页
     ·氨基酸对菌丝生长中期捕食器产生的影响第77-79页
     ·氨基酸对菌丝生长后期捕食器产生的影响第79页
   ·不同氨基酸诱导的捕食器对线虫第3 期幼虫的捕食效力第79-80页
  3 讨论第80-82页
  4 小结第82-83页
 试验四 少孢节从孢菌及线虫第三期幼虫生化组分分析第83-95页
  1 材料与方法第83-90页
   ·材料第83-84页
     ·主要设备与药品第83页
     ·主要化学溶液第83-84页
     ·捕食性真菌和线虫第三期幼虫第84页
   ·方法第84-90页
     ·少孢节丛孢菌分生孢子的培养第84-85页
     ·含捕食器菌丝的培养与收集第85页
     ·普通营养菌丝的培养与收集第85页
     ·少孢节丛孢菌和线虫第三期幼虫粗蛋白质测定第85-86页
     ·少孢节丛孢菌和线虫第三期幼虫氨基酸测定第86页
     ·少孢节丛孢菌总糖的测定第86-87页
     ·少孢节丛孢菌总蛋白电泳(SDS-PAGE)第87-89页
     ·少孢节丛孢菌普通营养菌丝和含捕食器菌丝蛋白酶活性测定第89-90页
  2 结果第90-92页
   ·少孢节丛孢菌和第三期线虫幼虫粗蛋白质含量第90页
   ·少孢节丛孢菌和第三期线虫幼虫氨基酸含量第90-91页
   ·普通营养菌丝和含捕食器菌丝总糖含量第91页
   ·普通营养菌丝和含捕食器菌丝全蛋白质SDS-PAGE 电泳结果第91-92页
   ·普通营养菌丝和含捕食器菌丝蛋白酶活性测定第92页
  3 讨论第92-93页
  4 小结第93-95页
 试验五 少孢节丛孢菌表面聚合物提取及其作用与性质研究第95-119页
  1 材料与方法第95-103页
   ·材料第95-97页
   ·方法第97-103页
     ·少孢节丛孢菌表面聚合物的提取第97页
     ·少孢节丛孢菌表面聚合物的透析与浓缩第97-98页
     ·少孢节丛孢菌表面聚合物凝胶电泳(SDS-PAGE)第98页
     ·各种提取液对菌丝生长与黏附捕获线虫作用的影响第98-99页
     ·少孢节丛孢菌表面聚合物体外杀线虫活性试验第99页
     ·少孢节丛孢菌表面聚合物中蛋白质含量测定第99-100页
     ·少孢节丛孢菌表面聚合物中蛋白酶活性检测第100页
     ·PH 值对少孢节丛孢菌表面聚合物中蛋白酶活性的影响第100页
     ·温度对少孢节丛孢菌表面聚合物中蛋白酶活性的影响第100-101页
     ·蛋白酶抑制剂对少孢节丛孢菌表面聚合物中蛋白酶活性的影响第101页
     ·少孢节丛孢菌表面聚合物中磷酸酶活性的测定第101-102页
     ·纤维素酶和链酶蛋白酶E 对少孢节丛孢菌菌丝生长和捕获线虫作用的影响第102页
     ·蛋白酶抑制剂对少孢节丛孢菌生长及黏附捕获和致死线虫能力的影响第102-103页
  2 结果第103-115页
   ·少孢节丛孢菌表面聚合物SDS-PAGE 电泳结果第103-104页
   ·各种提取液对菌丝生长和捕食器黏附捕获作用的影响第104-106页
     ·提取液对菌丝生长的影响第104-105页
     ·提取液对捕食器黏附捕获作用的影响第105-106页
   ·少孢节丛孢菌表面聚合物体外杀线虫作用第106-107页
   ·少孢节丛孢菌表面聚合物蛋白质含量测定结果第107-108页
   ·少孢节丛孢菌表面聚合物蛋白酶活性检测结果第108页
   ·PH 值对少孢节丛孢菌表面聚合物蛋白酶活性影响结果第108页
   ·温度对少孢节丛孢菌表面聚合物蛋白酶活性影响结果第108-109页
   ·蛋白酶抑制剂对少孢节丛孢菌表面聚合物中蛋白酶活性影响结果第109页
   ·少孢节丛孢菌表面聚合物磷酸酶活性测定结果第109-110页
   ·纤维素酶和链酶蛋白酶E 对少孢节丛孢菌生长与捕食作用影响第110-111页
     ·纤维素酶和链酶蛋白酶E 对少孢节丛孢菌生长影响第110-111页
     ·纤维素酶和链酶蛋白酶E 对少孢节丛孢菌黏附捕获线虫作用影响第111页
   ·蛋白酶抑制剂对少孢节丛孢菌生长及黏附捕获线虫能力影响第111-115页
     ·蛋白酶抑制剂对少孢节丛孢菌生长影响第111-113页
     ·蛋白酶抑制剂对少孢节丛孢菌致死线虫作用影响第113-114页
     ·蛋白酶抑制剂处理线虫后对少孢节丛孢菌捕获和致死线虫作用影响第114-115页
  3 讨论第115-118页
  4 小结第118-119页
 试验六 少孢节丛孢菌胞外蛋白酶的产生与性质研究第119-134页
  1 材料与方法第119-122页
   ·材料第119-120页
   ·方法第120-122页
     ·少孢节丛孢菌的培养与胞外蛋白酶的诱导分泌第120页
     ·少孢节丛孢菌培养滤液的浓缩处理第120页
     ·少孢节丛孢菌培养滤液的杀线虫毒性试验第120-121页
     ·酪蛋白平板消化试验第121页
     ·PH 值和温度及蛋白酶抑制剂对胞外蛋白酶活性的影响第121页
     ·少孢节丛孢菌培养滤液磷酸酶活性测定第121页
     ·少孢节丛孢菌培养滤液蛋白质含量测定第121页
     ·少孢节丛孢菌培养滤液SDS-PAGE 凝胶电泳第121页
     ·少孢节丛孢菌胞外蛋白酶最佳培养时间确定第121页
     ·少孢节丛孢菌培养滤液中胞外蛋白酶纯化第121-122页
     ·胞外蛋白酶纯度检测和分子量测定第122页
     ·PH 值和温度及蛋白酶抑制剂对丝氨酸蛋白酶活性影响第122页
  2 结果第122-130页
   ·少孢节丛孢菌培养滤液对线虫的毒力试验第122-123页
   ·少孢节丛孢菌培养滤液蛋白质含量测定结果第123-124页
   ·酪蛋白平板试验第124页
   ·PH 值对少孢节丛孢菌培养滤液胞外蛋白酶活性影响第124-125页
   ·温度对少孢节丛孢菌培养滤液胞外蛋白酶活性影响第125页
   ·蛋白酶抑制剂对少孢节丛孢菌培养滤液胞外蛋白酶活性影响第125-126页
   ·少孢节丛孢菌培养滤液磷酸酶活性测定结果第126-127页
   ·少孢节丛孢菌培养滤液SDS-PAGE 结果第127-128页
   ·培养时间对少孢节丛孢菌胞外蛋白酶产量影响第128-129页
   ·纯化蛋白的纯度及分子量测定第129页
   ·酪蛋白平板消化试验第129-130页
   ·蛋白酶的最佳作用温度和PH 值第130页
   ·蛋白酶抑制剂对纯化蛋白酶活性影响第130页
  3 讨论第130-132页
  4 小结第132-134页
 试验七 少孢节丛孢菌丝氨酸蛋白酶基因的序列分析与进化研究第134-143页
  1 材料和方法第134-137页
   ·材料第134-135页
   ·方法第135-137页
     ·少孢节丛孢菌培养第135页
     ·基因组DNA 提取第135页
     ·DNA 产物纯化第135-136页
     ·基因组DNA 检测第136页
     ·少孢节丛孢菌目的基因PCR 扩增第136-137页
     ·PCR 结果检测第137页
     ·PCR 扩增基因片段的纯化和回收第137页
     ·序列测定与分析第137页
  2 结果第137-141页
   ·基因组DNA 检测第137-138页
   ·PCR 扩增结果第138页
   ·PCR 扩增产物的酶切位点分析第138页
   ·目的基因片段的BLASTN 结果第138页
   ·少孢节丛孢菌内蒙分离株和GENBANK 中相关分离株的比较分析第138-139页
   ·丝氨酸蛋白酶氨基酸序列的比较分析第139-141页
  3 讨论第141-142页
  4 小结第142-143页
结论第143-145页
本课题创新点第145-146页
致谢第146-147页
参考文献第147-163页
作者简介第163页

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