| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-21页 |
| 1 松材线虫病及其危害 | 第9-14页 |
| ·分类地位 | 第9-10页 |
| ·形态特征 | 第10-11页 |
| ·起源与分布 | 第11页 |
| ·生活史 | 第11-12页 |
| ·寄主范围及病树症状 | 第12页 |
| ·防治 | 第12-14页 |
| 2. 苏云金芽孢杆菌的研究进展 | 第14-17页 |
| ·发展历史 | 第14-15页 |
| ·Bt的特性及杀虫活性 | 第15-16页 |
| ·Bt的资源和分布 | 第16页 |
| ·Bt的作用机理 | 第16页 |
| ·Bt对线虫作用的研究 | 第16-17页 |
| 3. 转化丝状真菌技术 | 第17-20页 |
| ·农杆菌 | 第17页 |
| ·农杆菌Ti质粒的结构 | 第17-18页 |
| ·农杆菌介导转化技术的机理 | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导转化技术在真菌中的应用 | 第19-20页 |
| 4. 本研究的目的和技术路线 | 第20-21页 |
| ·研究目的 | 第20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 载体pBI-GOH构建 | 第21-35页 |
| ·载体 | 第21页 |
| ·试验仪器 | 第21页 |
| ·酶与试剂 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-32页 |
| ·612bp片段的制备 | 第22-25页 |
| ·载体pBI-G的构建 | 第25-26页 |
| ·载体pBI-GO的构建 | 第26-27页 |
| ·潮霉素抗性基因片段的获得 | 第27-28页 |
| ·载体pBI-GOH的构建 | 第28-29页 |
| ·含目的基因的超表达载体的构建 | 第29-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-34页 |
| ·载体pBI-GOH的构建 | 第32-33页 |
| ·超表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·小结与讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 灰葡萄孢菌的遗传转化 | 第35-45页 |
| ·灰葡萄孢菌的遗传转化 | 第35-39页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·筛选转化子所需潮霉素浓度的确定 | 第35-36页 |
| ·根癌农杆菌的培养 | 第36页 |
| ·农杆菌感受态制作 | 第36页 |
| ·电转法转化农杆菌 | 第36-37页 |
| ·确定抑制农杆菌生长所需头孢霉素的浓度 | 第37页 |
| ·侵染菌液的制备 | 第37页 |
| ·用于农杆菌介导转化的灰葡萄孢菌菌丝的获得 | 第37-38页 |
| ·共培养及筛选 | 第38页 |
| ·转化子的遗传稳定性分析 | 第38-39页 |
| ·转基因灰葡萄孢菌的鉴定 | 第39-40页 |
| ·含sGFP基因的转化子的鉴定 | 第39页 |
| ·转基因灰葡萄孢菌DNA的提取 | 第39页 |
| ·转化子的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·转化子的Southern杂交鉴定 | 第40页 |
| ·转基因灰葡萄孢菌RT-PCR验证 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·潮霉素对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用 | 第41页 |
| ·抑制农杆菌生长所需头孢霉素浓度的确定 | 第41页 |
| ·转化子的遗传稳定性分析 | 第41页 |
| ·荧光检测 | 第41-42页 |
| ·PCR鉴定 | 第42页 |
| ·Southern杂交分析 | 第42-43页 |
| ·RT-PCR分析 | 第43页 |
| ·小结与讨论 | 第43-45页 |
| 第四章 Bt-06A晶体蛋白对松材线虫的种群繁殖量的影响 | 第45-48页 |
| ·试验材料 | 第45页 |
| ·试验仪器 | 第45页 |
| ·试验方法 | 第45-46页 |
| ·转基因灰葡萄孢菌的培养 | 第45-46页 |
| ·转基因灰葡萄孢菌饲喂线虫 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46页 |
| ·小结与讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 全文总结、创新点及下一步计划 | 第48-50页 |
| ·全文总结 | 第48页 |
| ·创新点 | 第48-49页 |
| ·下一步计划 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 附录A 序列 | 第59-72页 |
| 附录B 常用试剂及培养基配方 | 第72-75页 |
| 附录C：常用的抗生素配制方法及使用浓度 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77页 |