| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 1 材料与方法 | 第12-34页 |
| ·材料 | 第12-17页 |
| ·毒株与细胞 | 第12页 |
| ·载体和菌种 | 第12页 |
| ·主要试剂 | 第12-16页 |
| ·细胞培养试剂 | 第12-13页 |
| ·PCR试剂 | 第13页 |
| ·克隆用试剂 | 第13页 |
| ·真核表达用试剂 | 第13-15页 |
| ·酵母菌基因组DNA提取用试剂 | 第15页 |
| ·SDS-PAGE试剂 | 第15-16页 |
| ·免疫印迹用试剂 | 第16页 |
| ·主要实验仪器 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-34页 |
| ·引物设计与合成 | 第17-18页 |
| ·P32基因的克隆测序 | 第18-21页 |
| ·P32基因的扩增 | 第18页 |
| ·目的DNA的回收纯化 | 第18页 |
| ·基因的连接与转化 | 第18-20页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第20-21页 |
| ·P32基因序列的生物信息学分析 | 第21-22页 |
| ·P32基因的同源性分析 | 第21-22页 |
| ·P32蛋白的蛋白性质分析 | 第22页 |
| ·P32基因的原核表达 | 第22-27页 |
| ·P32基因的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第23-25页 |
| ·阳性重组质粒转化表达宿主菌 | 第25页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第25-26页 |
| ·表达产物Western-Blotting分析 | 第26-27页 |
| ·P32基因的真核表达 | 第27-32页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第27页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·阳性重组质粒转化表达宿主菌 | 第28-30页 |
| ·Mut表型的筛选 | 第30页 |
| ·重组子的PCR鉴定 | 第30-31页 |
| ·蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析 | 第32页 |
| ·表达产物Western-Blotting分析 | 第32页 |
| ·P32表达蛋白的抗原性分析 | 第32-34页 |
| ·蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·纯化P32蛋白的抗原性检测 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-51页 |
| ·PCR扩增结果 | 第34-35页 |
| ·P32的克隆测序 | 第35-36页 |
| ·目的DNA的克隆 | 第35页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·P32基因的生物信息学分析 | 第36-40页 |
| ·P32基因的同源性分析 | 第36-37页 |
| ·P32蛋白的跨膜结构预测 | 第37页 |
| ·P32蛋白的亲水性分析 | 第37-38页 |
| ·P32蛋白抗原指数、骨架柔韧性、表面可能性预测 | 第38页 |
| ·P32蛋白二级结构的预测 | 第38-39页 |
| ·P32蛋自B细胞抗原表位的综合评价 | 第39-40页 |
| ·P32基因的原核表达 | 第40-44页 |
| ·P32基因的PCR扩增结果 | 第40页 |
| ·重组表达质粒的PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·测序 | 第42页 |
| ·P32蛋白的表达结果 | 第42-44页 |
| ·蛋白的表达 | 第42页 |
| ·表达时间的优化 | 第42-43页 |
| ·IPTG剂量的优化 | 第43-44页 |
| ·表达产物的Western-Blotting分析结果 | 第44页 |
| ·P32基因的真核表达 | 第44-48页 |
| ·目的基因的PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| ·阳性重组质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第46页 |
| ·测序 | 第46页 |
| ·重组酵母菌的Mut型鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·重组酵母菌基因组PCR鉴定结果 | 第47页 |
| ·表达蛋白的SDS-PAGE分析结果 | 第47-48页 |
| ·表达蛋白的Western-Blotting分析结果 | 第48页 |
| ·表达蛋白的抗原性研究 | 第48-51页 |
| ·蛋白纯化的结果 | 第48-49页 |
| ·P32蛋白的抗原性检测 | 第49-51页 |
| ·P32蛋白的反应原性检测结果 | 第49-50页 |
| ·P32蛋白的免疫原性分析 | 第50-51页 |
| 3 讨论 | 第51-56页 |
| ·关于GPV基因组及P32基因 | 第51页 |
| ·关于P32基因的生物信息学分析 | 第51-53页 |
| ·关于P32基因的原核表达 | 第53-54页 |
| ·关于P32蛋白的毕赤酵母菌表达 | 第54-55页 |
| ·关于P32表达蛋白的纯化及抗原性 | 第55-56页 |
| 4 结论 | 第56-57页 |
| 综述 | 第57-73页 |
| 主要参考文献 | 第73-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 附录一 参与发表文章情况 | 第82-84页 |
| 附录二 本文用到的部分英文缩写及含义说明 | 第84-85页 |