| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 引言 | 第13-14页 |
| 第一章 朊蛋白和朊病毒疾病的概述 | 第14-33页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1. 朊病毒蛋白的发现 | 第15-16页 |
| 2. 朊病毒的研究进展 | 第16-19页 |
| ·"唯蛋白"假说的提出和内容 | 第16-17页 |
| ·PrP是朊病毒的主要组成部分 | 第17-18页 |
| ·朊病毒蛋白PrP~(Sc)的特殊性质 | 第18页 |
| ·有关朊病毒理论的一些不同观点 | 第18-19页 |
| 3. 朊蛋白的结构 | 第19-23页 |
| ·朊蛋白的基因结构 | 第20页 |
| ·朊蛋白的一级结构 | 第20-21页 |
| ·朊蛋白的三维结构 | 第21-23页 |
| 4. 正常朊蛋白PrP~C的生理功能 | 第23-26页 |
| ·PrP~C抗氧化功能 | 第23-24页 |
| ·PrP~C抗叠朊的神经毒性作用 | 第24页 |
| ·PrP~C的信号转导功能 | 第24-25页 |
| ·PrP~C参与维持神经系统正常功能 | 第25页 |
| ·PrP~C参与组织神经中的Cu~(2+)代谢 | 第25-26页 |
| 5. 朊病毒的分子致病机制 | 第26-30页 |
| ·正常朊蛋白和致病性朊蛋白分子学特性的比较 | 第26页 |
| ·朊蛋白构象的转变 | 第26-28页 |
| ·与朊蛋白空间构象转变相关的其他蛋白质 | 第28-29页 |
| ·致病性朊蛋白的复制增殖 | 第29-30页 |
| 6. 朊病毒病的诊断和防治 | 第30-32页 |
| ·朊病毒病的诊断 | 第30-31页 |
| ·朊病毒病的防治 | 第31-32页 |
| 7. 展望 | 第32-33页 |
| 第二章 calnexin蛋白的研究进展 | 第33-43页 |
| 引言 | 第33页 |
| 1. 分子伴侣的结构和结合位点 | 第33-35页 |
| 2. CNX和CRT的生物学功能 | 第35-40页 |
| ·帮助糖蛋白的折叠与装配 | 第35-37页 |
| ·参与内质网相关的蛋白质降解途径 | 第37-38页 |
| ·参与UPR过程,缓解内质网压力 | 第38-39页 |
| ·其他的一些功能 | 第39-40页 |
| 3. CNX和CRT的作用机制 | 第40-42页 |
| ·只依靠凝集素位点的结合模式 | 第40页 |
| ·依靠凝集素位点和多肽结合位点的双重结合模式 | 第40-42页 |
| 4. 展望 | 第42-43页 |
| 第三章 calnexin的克隆、表达和纯化 | 第43-67页 |
| 引言 | 第43页 |
| 1. 实验材料 | 第43-50页 |
| ·实验仪器 | 第43-44页 |
| ·实验材料与试剂 | 第44-46页 |
| ·缓冲液、溶液及培养基配方 | 第46-49页 |
| ·常用实验的基本操作 | 第49-50页 |
| 2. 实验方法 | 第50-59页 |
| ·LD-CNX表达载体克隆的构建 | 第50-53页 |
| ·LD-CNX的表达纯化 | 第53-55页 |
| ·PrP 23-231的表达纯化 | 第55-57页 |
| ·蛋白的浓缩和定量 | 第57页 |
| ·抗PrP 23-231抗血清的制备 | 第57-59页 |
| 3. 实验结果 | 第59-66页 |
| ·PET30a-LD-CNX表达质粒的构建 | 第59-60页 |
| ·LD-CNX蛋白的表达纯化 | 第60-63页 |
| ·PrP 23-231的表达纯化 | 第63-65页 |
| ·蛋白质定量 | 第65页 |
| ·抗体的制备 | 第65-66页 |
| 4. 讨论 | 第66-67页 |
| 第四章 calnexin和PrP体外相互作用的研究 | 第67-81页 |
| 引言 | 第67页 |
| 1. 实验材料 | 第67-70页 |
| ·实验仪器 | 第67-68页 |
| ·实验材料与试剂 | 第68页 |
| ·实验缓冲液的配置 | 第68-69页 |
| ·常用实验的基本操作 | 第69-70页 |
| 2. 实验方法 | 第70-73页 |
| ·用非变性胶验证LD-CNX和PrP 23-231的相互作用 | 第70-71页 |
| ·用OD_(405)浊度法验证LD-CNX抑制PrP 23-231的热聚集 | 第71-72页 |
| ·用静态光散射检测LD-CNX抑制PrP 23-231的聚集 | 第72页 |
| ·用Western-blot检测LD-CNX抑制PrP 23-231的聚集 | 第72页 |
| ·用分子筛检测LD-CNX抑制PrP 23-231的聚集 | 第72页 |
| ·用原子力显微镜检测LD-CNX抑制PrP 23-231的聚集 | 第72-73页 |
| 3. 实验结果 | 第73-79页 |
| ·非变性胶证实LD-CNX和PrP 23-231的体外相互作用 | 第73-74页 |
| ·浊度法测定LD-CNX抑制PrP 23-231的热聚集 | 第74-75页 |
| ·静态光散射法测定LD-CNX抑制PrP 23-231的热聚集 | 第75-76页 |
| ·Western-blot检测LD-CNX抑制PrP 23-231的聚集 | 第76-77页 |
| ·分子筛检测LD-CNX抑制PrP 23-231的聚集 | 第77-78页 |
| ·原子力显微镜从形态学上检测LD-CNX抑制PrP 23-231的聚集 | 第78-79页 |
| 4. 讨论 | 第79-81页 |
| 第五章 calnexin和PrP体内相互作用的研究 | 第81-99页 |
| 引言 | 第81页 |
| 1. 实验材料 | 第81-85页 |
| ·实验仪器 | 第81页 |
| ·实验材料与试剂 | 第81-82页 |
| ·缓冲液、溶液及培养基的配置 | 第82-83页 |
| ·常用实验的基本操作 | 第83-85页 |
| 2. 实验方法 | 第85-92页 |
| ·CNX真核表达载体的构建 | 第85-88页 |
| ·免疫共沉淀检测HuPrP~C和CNX体内的相互作用 | 第88-89页 |
| ·MTT法测定CNX对PrP造成细胞毒性的抑制 | 第89-91页 |
| ·流式细胞术测定CNX对PrP诱导的神经细胞凋亡的抑制 | 第91-92页 |
| 3. 实验结果 | 第92-97页 |
| ·pcDNA3.1-FL-CNX表达质粒的构建 | 第92-94页 |
| ·免疫共沉淀检测HuPrP~C和CNX体内的相互作用 | 第94页 |
| ·MTT法测定CNX对PrP造成细胞毒性的抑制 | 第94-96页 |
| ·流式细胞术测定CNX对PrP诱导的神经细胞凋亡的抑制 | 第96-97页 |
| 4. 讨论 | 第97-99页 |
| 研究总结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-115页 |
| 博士期间发表的论文 | 第115-116页 |
| 致谢 | 第116页 |
