| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 N-末端乙酰化 | 第12-13页 |
| 1.2 N-末端乙酰转移酶的分类 | 第13-14页 |
| 1.3 N-末端乙酰化的功能研究 | 第14-17页 |
| 1.3.1 N-末端乙酰化与蛋白的稳定性、折叠和降解 | 第14-15页 |
| 1.3.2 N-末端乙酰化与蛋白的亚细胞定位 | 第15-16页 |
| 1.3.3 N-末端乙酰化与蛋白的相互作用和复合物的形成 | 第16页 |
| 1.3.4 N-末端乙酰转移酶与生长发育、代谢和疾病 | 第16-17页 |
| 1.3.5 N-末端乙酰转移酶与癌症 | 第17页 |
| 1.4 N-末端乙酰转移酶的结构生物学研究进展 | 第17-21页 |
| 1.5 N-末端乙酰转移酶NatB的研究进展 | 第21-24页 |
| 1.5.1 酵母的N-末端乙酰转移酶NatB | 第22-23页 |
| 1.5.2 人和植物的N-末端乙酰转移酶NatB | 第23-24页 |
| 1.6 本论文的研究内容及意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-49页 |
| 2.1 材料 | 第26-32页 |
| 2.1.1 基因和引物 | 第26页 |
| 2.1.2 载体 | 第26-28页 |
| 2.1.3 菌株 | 第28页 |
| 2.1.4 实验主要酶和试剂 | 第28-30页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第30-32页 |
| 2.1.6 人工合成的多肽 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-49页 |
| 2.2.1 基因克隆 | 第32-35页 |
| 2.2.2 质粒的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.4 电泳相关实验方法 | 第38-40页 |
| 2.2.5 重组蛋白的表达 | 第40-41页 |
| 2.2.6 重组蛋白的纯化 | 第41-44页 |
| 2.2.7 蛋白质晶体生长及收集 | 第44-46页 |
| 2.2.8 蛋白-蛋白相互作用的检测 | 第46-47页 |
| 2.2.9 蛋白免疫印迹 | 第47-48页 |
| 2.2.10 N-末端乙酰转移酶活性测定 | 第48-49页 |
| 第三章 N-末端乙酰转移酶NatB的结构解析和活性研究 | 第49-90页 |
| 3.1 基因的克隆和载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第50-54页 |
| 3.2.1 重组蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 3.2.2 重组蛋白的纯化 | 第51-54页 |
| 3.3 NatB复合物的晶体筛选、优化和衍射 | 第54-56页 |
| 3.4 筛选新的NatB复合物截取体 | 第56-61页 |
| 3.4.1 新的NatB截取体复合物表达质粒的构建 | 第56-57页 |
| 3.4.2 新的NatB截取体复合物的表达和纯化 | 第57-59页 |
| 3.4.3 新的NatB截取体晶体的筛选和衍射数据收集 | 第59-61页 |
| 3.5 获取硒代甲硫氨酸NatB复合物晶体 | 第61-63页 |
| 3.5.1 硒代甲硫氨酸NatB复合物的表达和纯化 | 第61-63页 |
| 3.5.2 硒代甲硫氨酸NatB复合物的结晶 | 第63页 |
| 3.6 NatB与底物多肽复合物的晶体筛选与衍射 | 第63-65页 |
| 3.6.1 NatB与十九肽底物复合物的晶体 | 第64页 |
| 3.6.2 NatB与双底物抑制剂复合物的晶体 | 第64-65页 |
| 3.7 衍射数据的收集与处理 | 第65-66页 |
| 3.8 NatB复合物晶体结构模型质量分析 | 第66-70页 |
| 3.8.1 电子密度的吻合情况 | 第66-69页 |
| 3.8.2 NatB复合物的立体化学分析 | 第69-70页 |
| 3.8.3 NatB复合物的温度因子分布 | 第70页 |
| 3.9 NatB复合物的整体结构研究 | 第70-87页 |
| 3.9.1 NatB复合物的整体结构 | 第71-72页 |
| 3.9.2 辅助亚基与催化亚基之间的相互作用 | 第72-75页 |
| 3.9.3 NatB复合物的亚基结构 | 第75-77页 |
| 3.9.4 与其他N-末端乙酰转移酶的结构比较 | 第77-78页 |
| 3.9.5 催化亚基Naa20和辅酶A的结合 | 第78-81页 |
| 3.9.6 NatB复合物底物的特异性识别和结合 | 第81-82页 |
| 3.9.7 NatB复合物的点突变和体外乙酰化反应 | 第82-86页 |
| 3.9.8 NatB复合物的可能催化机制 | 第86-87页 |
| 3.10 小结 | 第87-90页 |
| 第四章 非复合物状态下NatB的亚基结构解析 | 第90-95页 |
| 4.1 催化亚基Naa20的表达和纯化 | 第90页 |
| 4.2 辅助亚基Naa25的表达和纯化 | 第90-94页 |
| 4.2.1 辅助亚基Naa25的晶体筛选和结构解析 | 第92-94页 |
| 4.2.2 复合体状态与非复合体状态的Naa25的结构比较 | 第94页 |
| 4.3 小结 | 第94-95页 |
| 第五章 结果与讨论 | 第95-97页 |
| 附录1 图表索引 | 第97-99页 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
