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IGF2基因来源的IGF2 AS和miR-483调控牛骨骼肌细胞增殖分化机制研究

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-11页
前言第16-18页
文献综述第18-37页
    第一章 动物骨骼肌发育及其非编码RNA调控研究进展第18-37页
        1.1 骨骼肌发育研究进展第18-29页
            1.1.1 生肌调控因子在骨骼肌形成过程中的作用第18-20页
            1.1.2 肌细胞增强因子2家族成员在骨骼肌形成过程中的作用第20-22页
            1.1.3 Pax3/Pax7与骨骼肌形成第22-23页
            1.1.4 Wnt信号与骨骼肌形成第23-24页
            1.1.5 Shh信号与骨骼肌形成第24-25页
            1.1.6 BMP信号与骨骼肌形成第25-26页
            1.1.7 Notch信号与骨骼肌形成第26-27页
            1.1.8 生长因子与骨骼肌形成第27-29页
        1.2 非编码RNA的研究进展第29-35页
            1.2.1 miRNA的研究进展第29-32页
            1.2.2 LncRNAs的研究进展第32-35页
        1.3 非编码RNA在牛骨骼肌发育中的研究概况第35-37页
            1.3.1 牛骨骼肌发育过程中涉及到的miRNAs第35页
            1.3.2 牛骨骼肌发育过程中涉及到的lncRNAs第35-37页
试验研究第37-89页
    第二章 长链非编码RNA IGF2 AS的筛选、鉴定及表达规律分析第37-47页
        2.1 材料与方法第37-40页
            2.1.1 试验仪器第37页
            2.1.2 试验样品采集第37页
            2.1.3 RNA-seq文库构建和测序分析第37-38页
            2.1.4 差异表达lncRNA的筛选第38页
            2.1.5 牛原代骨骼肌细胞的分离培养第38页
            2.1.6 总RNA的提取和反转录第38-39页
            2.1.7 LncRNA全长序列获取及序列特征分析第39-40页
            2.1.8 实时荧光定量PCR分析第40页
        2.2 结果第40-45页
            2.2.1 牛不同发育阶段骨骼肌差异表达的lncRNA筛选第40-42页
            2.2.2 LncRNA IGF2 AS的序列获取和结构特征第42页
            2.2.3 LncRNA IGF2 AS的组织表达特征第42-44页
            2.2.4 LncRNA IGF2 AS在牛骨骼肌细胞生长和分化阶段的表达特征第44-45页
        2.3 讨论第45-46页
        2.4 小结第46-47页
    第三章 LNCRNA IGF2 AS对牛骨骼肌细胞增殖、分化和凋亡的调控研究第47-59页
        3.1 材料与方法第47-50页
            3.1.1 lncRNA IGF2 AS的过表达载体构建和干扰片段合成第47-48页
            3.1.2 牛骨骼肌原代细胞的分离培养和转染第48页
            3.1.3 细胞总RNA提取、反转录和实时荧光定量PCR第48页
            3.1.4 CCK-8检测细胞增殖状态第48页
            3.1.5 EdU检测细胞增殖阶段S期阳性细胞数目第48页
            3.1.6 细胞周期检测第48-49页
            3.1.7 蛋白免疫印迹第49-50页
            3.1.8 细胞免疫荧光第50页
            3.1.9 RNA-seq文库构建和测序分析第50页
            3.1.10 细胞凋亡检测第50页
            3.1.11 统计分析第50页
        3.2 结果第50-57页
            3.2.1 IGF2 AS促进牛骨骼肌细胞增殖第50-53页
            3.2.2 IGF2 AS促进牛骨骼肌细胞分化第53-55页
            3.2.3 IGF2 AS抑制牛骨骼肌细胞凋亡第55-57页
        3.3 讨论第57-58页
        3.4 小结第58-59页
    第四章 LNCRNA IGF2 AS调控牛骨骼肌发育的机制研究第59-74页
        4.1 材料与方法第59-62页
            4.1.1 RNA核质分离第59页
            4.1.2 荧光原位杂交第59-60页
            4.1.3 普通PCR扩增第60页
            4.1.4 实时荧光定量PCR第60页
            4.1.5 RIP分析第60页
            4.1.6 载体构建和双荧光素酶报告分析第60-61页
            4.1.7 RNA pull down分析第61页
            4.1.8 蛋白免疫印迹第61页
            4.1.9 放线菌素D处理细胞第61-62页
            4.1.10 统计分析第62页
        4.2 结果第62-72页
            4.2.1 IGF2 AS的亚细胞定位第62页
            4.2.2 IGF2 AS可与其宿主基因IGF2 mRNA前体序列结合第62-64页
            4.2.3 IGF2 AS可能通过影响IGF2的稳定性调控IGF2的表达第64-65页
            4.2.4 IGF2 AS通过竞争性结合miR-221/miR-222促进牛骨骼肌细胞分化第65-68页
            4.2.5 IGF2 AS通过结合ILF3蛋白促进牛骨骼肌发育第68-72页
        4.3 讨论第72-73页
        4.4 小结第73-74页
    第五章 MIR-483的筛选及其对牛骨骼肌细胞增殖和分化的功能研究第74-83页
        5.1 材料与方法第74-76页
            5.1.1 试验样品第74页
            5.1.2 总RNA提取第74页
            5.1.3 miRNA测序文库构建第74页
            5.1.4 差异表达的miRNA筛选第74页
            5.1.5 牛骨骼肌原代细胞的分离培养和转染第74-75页
            5.1.6 miRNA特异反转录和实时荧光定量PCR第75页
            5.1.7 CCK-8检测细胞增殖状态第75页
            5.1.8 EdU检测细胞增殖阶段S期阳性细胞数目第75页
            5.1.9 细胞周期检测第75页
            5.1.10 细胞免疫荧光第75-76页
            5.1.11 蛋白免疫印迹第76页
            5.1.12 统计分析第76页
        5.2 结果第76-82页
            5.2.1 miR-483的组织表达特征第76页
            5.2.2 miR-483在牛骨骼肌细胞生长和分化阶段的时序分析第76-77页
            5.2.3 miR-483抑制牛骨骼肌细胞增殖第77-79页
            5.2.4 miR-483抑制牛骨骼肌细胞分化第79-82页
        5.3 讨论第82页
        5.4 小结第82-83页
    第六章 MIR-483通过IGF1/PI3K/AKT信号通路调控牛骨骼肌细胞增殖和分化第83-89页
        6.1 材料与方法第83页
            6.1.1 miR-483的靶基因预测第83页
            6.1.2 细胞培养第83页
            6.1.3 载体构建和双荧光素酶报告分析第83页
            6.1.4 蛋白免疫印迹第83页
            6.1.5 统计分析第83页
        6.2 结果第83-87页
            6.2.1 miR-483的序列保守性分析和靶基因预测第83-84页
            6.2.2 miR-483降低IGF1双荧光素酶报告载体活性第84-85页
            6.2.3 miR-483通过IGF1/PI3K/AKT信号通路调控牛骨骼肌细胞增殖和分化第85-87页
        6.3 讨论第87-88页
        6.4 小结第88-89页
结论与创新点第89-90页
    结论第89页
    创新点第89-90页
参考文献第90-99页
附录第99-113页
致谢第113-114页
个人简历第114-115页

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