摘要 | 第11-12页 |
Abstract | 第12页 |
第一章 前言 | 第13-28页 |
1.1 G蛋白 | 第13页 |
1.2 小分子GTP酶 | 第13-15页 |
1.3 Rab蛋白 | 第15-25页 |
1.3.1 Rab蛋白的结构 | 第16-17页 |
1.3.2 Rab蛋白的调控机制 | 第17-19页 |
1.3.3 Rab蛋白的亚细胞定位 | 第19-20页 |
1.3.4 Rab蛋白的功能 | 第20-23页 |
1.3.5 Rab蛋白与疾病 | 第23-25页 |
1.4 Rab26 | 第25-27页 |
1.4.1 Rab26的结构 | 第25页 |
1.4.2 Rab26的定位与功能 | 第25-27页 |
1.5 本论文的研究目的与意义 | 第27-28页 |
第二章 材料与方法 | 第28-56页 |
2.1 材料 | 第28-37页 |
2.1.1 实验菌株、细胞、质粒以及引物 | 第28-30页 |
2.1.2 常用抗体 | 第30-31页 |
2.1.3 主要试剂药品与耗材 | 第31-34页 |
2.1.4 常用溶液组分 | 第34-36页 |
2.1.5 主要仪器与设备 | 第36-37页 |
2.2 实验方法 | 第37-56页 |
2.2.1 常用标签表达载体的构建 | 第37-42页 |
2.2.2 RNAi真核细胞表达载体的构建 | 第42-43页 |
2.2.3 原核蛋白的表达和纯化 | 第43-45页 |
2.2.4 细胞培养 | 第45-48页 |
2.2.5 免疫荧光实验 | 第48页 |
2.2.6 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48-49页 |
2.2.7 免疫印迹 | 第49-50页 |
2.2.8 细胞划痕实验 | 第50页 |
2.2.9 Transwell迁移实验 | 第50-51页 |
2.2.10 Matrigel侵袭实验 | 第51页 |
2.2.11 RTCA细胞迁移检测 | 第51-52页 |
2.2.12 Large Scale GST-pull down实验 | 第52-55页 |
2.2.13 免疫共沉淀实验 | 第55-56页 |
第三章 实验结果 | 第56-80页 |
3.1 Rab26相关载体的构建 | 第56-58页 |
3.1.1 Rab26WT及其点突变质粒的构建 | 第56-57页 |
3.1.2 Rab26 shRNA质粒的构建 | 第57-58页 |
3.2 Rab26相关质粒的鉴定 | 第58-62页 |
3.2.1 GFP-Rab26载体的鉴定 | 第58-60页 |
3.2.2 Myc-Rab26载体的鉴定 | 第60页 |
3.2.3 Rab26腺病毒的鉴定 | 第60-61页 |
3.2.4 GST-Rab26原核表达载体的鉴定 | 第61-62页 |
3.3 Rab26组织表达谱分析 | 第62-63页 |
3.4 Rab26调节乳腺癌细胞的迁移与侵袭 | 第63-70页 |
3.4.1 过表达Rab26抑制乳腺癌细胞的迁移与侵袭 | 第63-66页 |
3.4.2 敲低Rab26促进乳腺癌细胞的迁移与侵袭 | 第66-70页 |
3.5 Rab26与迁移侵袭的调控机制 | 第70-76页 |
3.5.1 Rab26对EMT标志物表达水平的影响 | 第70-71页 |
3.5.2 Rab26与RILP相互作用对乳腺癌细胞迁移的影响 | 第71-73页 |
3.5.3 Rab26促进EGFR降解 | 第73-75页 |
3.5.4 Rab26对Erk、AKT信号通路的影响 | 第75-76页 |
3.6 Large scale GST-pulldown筛选Rab26相互作用蛋白 | 第76-80页 |
第四章 讨论 | 第80-82页 |
第五章 结论 | 第82-83页 |
附录 | 第83-87页 |
参考文献 | 第87-94页 |
致谢 | 第94页 |