| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-35页 |
| 第一节 PIK3CA突变与肿瘤分子靶向治疗 | 第12-19页 |
| 1.1 肿瘤的分子靶向治疗 | 第12-14页 |
| 1.2 PI3K-AKT-mTOR信号通路概述 | 第14-15页 |
| 1.3 PIK3CA基因突变及其分子生物学意义 | 第15-16页 |
| 1.4 PIK3CA基因突变在靶向治疗中的预测作用 | 第16-18页 |
| 1.5 PIK3CA基因突变检测的意义 | 第18-19页 |
| 第二节 PIK3CA突变检测方法 | 第19-24页 |
| 2.1直接测序法（Direct Sequencing) | 第20页 |
| 2.2 COLD-PCR 测序法（COLD-PCR Sequencing) | 第20-21页 |
| 2.3 变性高效液相色谱法（Denaturing High Performance LiquidChromatography, dHPLC) | 第21-22页 |
| 2.4 高分辨率熔解曲线分析技术(High Resolution Melting Curve analysis，HRM) | 第22页 |
| 2.5 扩增阻碍突变系统（Amplification Refractory Mutation System, ARMS) | 第22-23页 |
| 2.6 数字 PCR (Digital PCR) | 第23-24页 |
| 第三节 锁核酸概述 | 第24-26页 |
| 3.1 LNA简介 | 第24-25页 |
| 3.2 LNA的性质 | 第25-26页 |
| 3.3 LNA在肿癟稀有突变检测中的应用 | 第26页 |
| 第四节 本论文的研究内容 | 第26-28页 |
| 参考文献 | 第28-35页 |
| 第二章 PIK3CA稀有突变富集检测技术的的研究和应用 | 第35-92页 |
| 第一节 Looping out锁核酸探针用于PIK3CA突变检测 | 第35-63页 |
| 1.1 引言 | 第35-36页 |
| 1.2 材料与方法 | 第36-45页 |
| 1.2.1 细胞系DNA与临床标本 | 第36-37页 |
| 1.2.2 突变型阳性质粒的构建 | 第37-40页 |
| 1.2.3 引物和探针设计 | 第40-42页 |
| 1.2.4 人工合成靶序列熔解曲线分析 | 第42页 |
| 1.2.5 检测体系的优化 | 第42-43页 |
| 1.2.6 检测体系灵敏度考察 | 第43页 |
| 1.2.7 检测体系选择性考察 | 第43-44页 |
| 1.2.8 临床标本检测 | 第44-45页 |
| 1.2.9 数字PCR体系建立 | 第45页 |
| 1.3 结果 | 第45-60页 |
| 1.3.1 LPO-MMCA检测体系的建立 | 第45-51页 |
| 1.3.2 LPO-MMCA体系灵敏度考察 | 第51页 |
| 1.3.3 LPO-MMCA体系选择性考察 | 第51-53页 |
| 1.3.4 临床冰冻组织标本检测 | 第53-60页 |
| 1.4 讨论 | 第60-63页 |
| 第二节 LNA阻抑子预富集技术用于PIK3CA突变检测 | 第63-84页 |
| 2.1 引言 | 第63-64页 |
| 2.2 材料与方法 | 第64-69页 |
| 2.2.1 细胞系DNA、临床样本来源和突变阳性质粒的构建 | 第64页 |
| 2.2.2 引物和探针的设计 | 第64-66页 |
| 2.2.3 BK-MMCA检测体系的建立 | 第66-68页 |
| 2.2.4 检测体系灵敏度考察 | 第68-69页 |
| 2.2.5 检测体系选择性考察 | 第69页 |
| 2.2.6 临床标本检测 | 第69页 |
| 2.3 结果 | 第69-81页 |
| 2.3.1 BK-MMCA体系的建立 | 第69-71页 |
| 2.3.2 预富集体系LNA阻抑子阻抑性能考察 | 第71-73页 |
| 2.3.3 BK-MMCA体系高保真酶保真性考察 | 第73-74页 |
| 2.3.4 BK-MMCA体系灵敏度考察 | 第74-75页 |
| 2.3.5 BK-MMCA体系选择性考察 | 第75-76页 |
| 2.3.6 临床标本检测 | 第76-81页 |
| 2.4 讨论 | 第81-84页 |
| 第三节 PIK3CA稀有突变富集检测技术总结 | 第84-88页 |
| 参考文献 | 第88-92页 |
| 英文缩写索引 | 第92-93页 |
| 硕士期间发表交流论文 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
