| 致谢 | 第6-10页 |
| 缩略词 | 第10-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 前言 | 第16-18页 |
| 1 文献综述 | 第18-28页 |
| 1.1 花粉发育 | 第18-20页 |
| 1.1.1 花粉发育过程 | 第18页 |
| 1.1.2 花粉壁发育 | 第18-20页 |
| 1.1.2.1 花粉壁的结构 | 第19页 |
| 1.1.2.2 花粉壁的发育过程 | 第19页 |
| 1.1.2.3 与花粉壁发育相关的基因 | 第19-20页 |
| 1.2 泛素化系统 | 第20-22页 |
| 1.2.1 泛素 | 第20-21页 |
| 1.2.2 E1泛素激活酶 | 第21页 |
| 1.2.3 E2泛素结合酶 | 第21页 |
| 1.2.4 E3泛素连接酶 | 第21-22页 |
| 1.3 植物E3泛素连接酶的生物学功能 | 第22-28页 |
| 1.3.1 植物E3泛素连接酶与胁迫响应 | 第22-24页 |
| 1.3.1.1 生物胁迫 | 第22-23页 |
| 1.3.1.2 非生物胁迫 | 第23-24页 |
| 1.3.2 植物E3泛素连接酶与植物激素 | 第24-26页 |
| 1.3.2.1 E3泛素连接酶在ABA信号传导机制中的重要性 | 第24-25页 |
| 1.3.2.2 E3泛素连接酶参与JA的合成、信号转导等过程 | 第25-26页 |
| 1.3.2.3 E3泛素连接酶影响水杨酸,生长素,乙烯等激素响应过程 | 第26页 |
| 1.3.3 植物E3泛素连接酶与花粉发育 | 第26-28页 |
| 2 白菜E3泛素连接酶基因BcMF29的表达分析 | 第28-42页 |
| 2.1 材料与方法 | 第28-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28-29页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 白菜核不育两用系ajhGMS'Bcajh97-01A/B'的人工授粉 | 第29页 |
| 2.1.4 基因组DNA和总RNA的提取及cDNA合成 | 第29-31页 |
| 2.1.4.1 基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 2.1.4.2 基因组DNA粗提取 | 第30页 |
| 2.1.4.3 植物总RNA的提取及cDNA合成 | 第30-31页 |
| 2.1.5 大肠杆菌DH5α感受态的制备以及转化 | 第31-32页 |
| 2.1.5.1 大肠杆菌感受态DH5α的制备 | 第31页 |
| 2.1.5.2 热激法转化大肠杆菌感受态DH5α | 第31-32页 |
| 2.1.6 农杆菌GV3101感受态的制备以及转化 | 第32-33页 |
| 2.1.6.1 农杆菌感受态GV3101的制备 | 第32页 |
| 2.1.6.2 冻融法转化农杆菌 | 第32-33页 |
| 2.1.7 CDS和DNA序列全长的扩增 | 第33页 |
| 2.1.8 生物信息学分析 | 第33页 |
| 2.1.9 RT-PCR分析 | 第33-34页 |
| 2.1.10 实时荧光定量PCR分析 | 第34页 |
| 2.1.11 亚细胞定位分析 | 第34-35页 |
| 2.1.11.1 亚细胞定位载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.1.11.2 农杆菌介导烟草体内瞬时表达观察BcMF29的亚细胞定位情况 | 第35页 |
| 2.2 结果 | 第35-40页 |
| 2.2.1 获得目的基因的CDS和DNA全长 | 第35-36页 |
| 2.2.2 目的基因序列分析 | 第36页 |
| 2.2.3 BcMF29在花序中相对表达量较高 | 第36-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-42页 |
| 3 白菜E3泛素连接酶基因BcMF29的过表达鉴定 | 第42-54页 |
| 3.1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 过表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.1.4 过表达载体对菜心的遗传转化 | 第43-44页 |
| 3.1.4.1 培养基的配制 | 第43-44页 |
| 3.1.4.2 播种培养 | 第44页 |
| 3.1.4.3 共培养 | 第44页 |
| 3.1.4.4 分化培养 | 第44页 |
| 3.1.4.5 继代培养及生根培养 | 第44页 |
| 3.1.4.6 移栽 | 第44页 |
| 3.1.5 过表达植株的分子检测 | 第44-45页 |
| 3.1.5.1 过表达植株基因组DNA、总RNA的提取和cDNA的合成 | 第44-45页 |
| 3.1.5.2 过表达转基因植株的PCR检测 | 第45页 |
| 3.1.5.3 过表达转基因植株的实时荧光定量PCR检测 | 第45页 |
| 3.1.6 过表达转基因植株的形态学与细胞学观察 | 第45-46页 |
| 3.1.6.1 植株的形态学观察 | 第45页 |
| 3.1.6.2 花粉生活力观察 | 第45页 |
| 3.1.6.3 花粉体外萌发 | 第45-46页 |
| 3.1.6.4 花粉形态扫描电镜观察 | 第46页 |
| 3.1.6.5 花药半薄切片和透射电镜观察 | 第46页 |
| 3.2 结果 | 第46-51页 |
| 3.2.1 成功获得BcMF29过表达载体 | 第46页 |
| 3.2.2 成功获得BcMF29过表达菜心植株 | 第46-48页 |
| 3.2.3 BcMF29在过表达转基因菜心植株花序中的表达上调 | 第48页 |
| 3.2.4 BcMF29过量表达导致花粉发育异常 | 第48-50页 |
| 3.2.5 花粉发育异常始于双核花粉粒时期 | 第50页 |
| 3.2.6 畸形花粉粒内壁发育异常 | 第50-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-54页 |
| 4 CRISPR/Cas9技术敲除白菜E3泛素连接酶基因BcMF29 | 第54-64页 |
| 4.1 材料与方法 | 第54-58页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第54页 |
| 4.1.2 主要实验试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 CRISPR/Cas9敲除载体的构建 | 第54-56页 |
| 4.1.4 敲除载体对菜心的遗传转化 | 第56-57页 |
| 4.1.5 敲除植株的分子检测 | 第57-58页 |
| 4.2 结果 | 第58-61页 |
| 4.2.1 成功构建BcMF29敲除载体 | 第58-59页 |
| 4.2.2 BcMF29敲除载体成功转入菜心植株 | 第59-60页 |
| 4.2.3 BcMF29敲除转基因植株发生基因编辑 | 第60-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-64页 |
| 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 在读期间发表的论文 | 第76页 |
