| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 L-异亮氨酸 | 第11-14页 |
| 1.1.1 L-异亮氨酸的性质 | 第11页 |
| 1.1.2 L-异亮氨酸的用途及市场需求 | 第11页 |
| 1.1.3 L-异亮氨酸的在谷氨酸棒杆菌中的合成途径 | 第11-13页 |
| 1.1.4 L-异亮氨酸的国内外研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2 可降解塑料和聚羟基脂肪酸酯(PHA) | 第14-19页 |
| 1.2.1 PHA的性质 | 第15页 |
| 1.2.2 PHA的合成途径 | 第15-16页 |
| 1.2.3 PHBV的合成途径 | 第16页 |
| 1.2.4 PHBV生产的国内外研究现状 | 第16-18页 |
| 1.2.5 PHA与其他产物的联产 | 第18-19页 |
| 1.3 半胱氨酸合成酶A(CysK) | 第19-21页 |
| 1.3.1 CysK在半胱氨酸合成途径中的功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2 CysK可能存在的其他功能 | 第20-21页 |
| 1.4 本论文的主要研究内容 | 第21-24页 |
| 1.4.1 立题依据和研究意义 | 第21-22页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第22-24页 |
| 第二章 通过辅因子工程改造谷氨酸棒杆菌生产L-异亮氨酸 | 第24-50页 |
| 2.1 引言 | 第24-25页 |
| 2.2 材料和方法 | 第25-38页 |
| 2.2.1 菌株、质粒及相关引物 | 第25-26页 |
| 2.2.2 试剂和仪器 | 第26-27页 |
| 2.2.3 培养基与培养条件 | 第27-29页 |
| 2.2.4 分子生物学操作 | 第29-35页 |
| 2.2.5 发酵参数测定 | 第35-37页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第37页 |
| 2.2.7 NADPH/NADP+的测定 | 第37-38页 |
| 2.3 实验结果 | 第38-47页 |
| 2.3.1 强化HMP途径一系列谷氨酸棒杆菌IWJ001重组菌的构建 | 第38-40页 |
| 2.3.2 谷氨酸棒杆菌各重组IWJ001菌株的蛋白表达SDS-PAGE分析 | 第40-42页 |
| 2.3.3 谷氨酸棒杆菌重组IWJ001菌株的摇瓶发酵 | 第42-43页 |
| 2.3.4 重组菌株NADPH水平测定 | 第43-44页 |
| 2.3.5 重组菌株基因转录水平测定 | 第44-45页 |
| 2.3.6 IWJ001重组菌株的上罐发酵 | 第45-47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-49页 |
| 2.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 第三章 cysK基因在谷氨酸棒杆菌中新功能的发现和研究 | 第50-63页 |
| 3.1 引言 | 第50-51页 |
| 3.2 材料和方法 | 第51-53页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第51页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第51页 |
| 3.2.3 培养基和培养条件 | 第51-52页 |
| 3.2.4 qRT-PCR | 第52页 |
| 3.2.5 扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、激光共聚焦显微镜(LCFM) | 第52页 |
| 3.2.6 细胞膜渗透性分析 | 第52页 |
| 3.2.7 菌膜形成能力测定 | 第52页 |
| 3.2.8 摇瓶发酵和上罐发酵 | 第52-53页 |
| 3.2.9 残糖、氨基酸的测定 | 第53页 |
| 3.3 实验结果 | 第53-60页 |
| 3.3.1 重组菌株的构建 | 第53-54页 |
| 3.3.2 谷氨酸棒杆菌重组菌株IWJ001/pDXW-8-cysK的蛋白表达SDS-PAGE分析 | 第54页 |
| 3.3.3 谷氨酸棒杆菌IWJ001重组菌株的摇瓶发酵 | 第54-55页 |
| 3.3.4 CysK过表达带来了菌体“先抑后扬”生长模式 | 第55-56页 |
| 3.3.5 CysK过表达对L-异亮氨酸合成途径关键基因转录水平的影响 | 第56-57页 |
| 3.3.6 CysK过表达影响了谷氨酸棒杆菌IWJ001细胞形态和细胞分裂 | 第57-58页 |
| 3.3.7 CysK过表达影响了谷氨酸棒杆菌IWJ001的外膜渗透性和菌膜形成能力 | 第58-59页 |
| 3.3.8 补料分批发酵 | 第59-60页 |
| 3.4 讨论 | 第60-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 异源表达phaCAB基因簇联产PHA提高L-异亮氨酸产量 | 第63-76页 |
| 4.1 引言 | 第63-65页 |
| 4.2 材料和方法 | 第65-67页 |
| 4.2.1 菌株、质粒和引物 | 第65-66页 |
| 4.2.2 试剂和仪器 | 第66页 |
| 4.2.3 培养基和培养条件 | 第66页 |
| 4.2.4 分子生物学操作 | 第66页 |
| 4.2.5 谷氨酸棒杆菌发酵参数测定 | 第66页 |
| 4.2.6 qRT-PCR | 第66页 |
| 4.2.7 尼罗红染色和激光共聚焦显微镜(LCFM)观察 | 第66-67页 |
| 4.3 实验结果 | 第67-74页 |
| 4.3.1 构建PHA合成相关基因的表达质粒和重组菌株 | 第67-68页 |
| 4.3.2 重组质粒携带基因的蛋白表达SDS-PAGE分析 | 第68页 |
| 4.3.3 重组菌株IWJ001/pDXW-8-phaCAB的摇瓶发酵 | 第68-70页 |
| 4.3.4 重组菌株IWJ001/pDXW-8-phaA,IWJ001/pDXW-8-phaAB和IWJ001/pDXW-8-phaCAB的摇瓶发酵 | 第70页 |
| 4.3.5 摇瓶发酵重组菌株胞内PHA颗粒观察 | 第70-72页 |
| 4.3.6 重组菌IWJ001/pDXW-8-phaCAB中关键基因的转录水平分析 | 第72页 |
| 4.3.7 重组菌IWJ001/pDXW-8-phaCAB的3-L罐上发酵 | 第72-74页 |
| 4.4 讨论 | 第74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-76页 |
| 第五章 谷氨酸棒杆菌IWJ001生产PHBV的鉴定及机制探讨 | 第76-98页 |
| 5.1 引言 | 第76页 |
| 5.2 材料和方法 | 第76-80页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第76-77页 |
| 5.2.2 主要试剂 | 第77页 |
| 5.2.3 主要仪器 | 第77-78页 |
| 5.2.4 培养基和培养条件 | 第78页 |
| 5.2.5 分子生物学操作 | 第78-79页 |
| 5.2.6 胞内PHA的电镜观察 | 第79页 |
| 5.2.7 PHA结构鉴定及定量 | 第79页 |
| 5.2.8 胞内乙酰辅酶A和丙酰辅酶A的测定 | 第79-80页 |
| 5.3 结果和分析 | 第80-94页 |
| 5.3.0 重组菌ATCC13869/pDXW-8和ATCC13869/pDXW-8-phaCAB的构建及突变株IWJ001ΔprpC的构建 | 第80-81页 |
| 5.3.1 重组菌IWJ001/pDXW-8和IWJ001/pDXW-8-phaCAB胞内合成PHA电镜观察 | 第81-83页 |
| 5.3.2 重组菌ATCC13869/pDXW-8和ATCC13869/pDXW-8-phaCAB摇瓶发酵合成PHA | 第83-84页 |
| 5.3.3 IWJ001/pDXW-8-phaCAB胞内PHA的提取及其结构的气质联用质谱分析 | 第84-87页 |
| 5.3.4 摇瓶发酵重组菌IWJ001/pDXW-8-phaCAB的PHBV产量及3HV组分定量 | 第87-88页 |
| 5.3.5 罐上发酵PHBV的产量及3HV组分定量 | 第88页 |
| 5.3.6 IWJ001/pDXW-8-phaCAB合成PHBV并高产3HV比例的机制分析 | 第88-92页 |
| 5.3.7 通过构建IWJ001ΔprpC突变株进一步提高胞内丙酰辅酶A合成量 | 第92-93页 |
| 5.3.8 丙酰辅酶A来源分析 | 第93-94页 |
| 5.4 讨论 | 第94-96页 |
| 5.5 本章小结 | 第96-98页 |
| 主要结论与展望 | 第98-100页 |
| 主要结论 | 第98-99页 |
| 展望 | 第99-100页 |
| 论文主要创新点 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-107页 |
| 附录 ：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第107页 |
