| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 符号与缩略语说明 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-28页 |
| 1 新烟碱类杀虫剂的概况 | 第14-16页 |
| 1.1 新烟碱类杀虫剂的简介 | 第14页 |
| 1.2 新烟碱类杀虫剂的种类 | 第14-16页 |
| 1.3 新烟碱类杀虫剂的危害 | 第16页 |
| 2 啶虫脒简介 | 第16-22页 |
| 2.1 啶虫脒的理化性质 | 第16-17页 |
| 2.2 啶虫脒的特点 | 第17页 |
| 2.3 啶虫脒的代谢研究进展 | 第17-19页 |
| 2.4 啶虫脒的微生物代谢研究 | 第19-21页 |
| 2.5 啶虫脒降解基因研究 | 第21-22页 |
| 3 土壤微生物的分析及其研究方法 | 第22-26页 |
| 3.1 土壤微生物的分析 | 第22-23页 |
| 3.2 土壤微生物多样性的研究方法 | 第23-26页 |
| 4 本研究的目的和意义和技术路线 | 第26-28页 |
| 4.1 本研究的目的和意义 | 第26页 |
| 4.2 本研究的技术路线 | 第26-28页 |
| 第二部分 实验部分 | 第28-96页 |
| 第一章 啶虫脒降解菌的分离与鉴定 | 第28-40页 |
| 1 材料与方法 | 第28-33页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第28页 |
| 1.2 啶虫脒降解菌的分离及筛选 | 第28-29页 |
| 1.3 降解菌株的形态特征及生理生化鉴定 | 第29页 |
| 1.4 降解菌株的16S rRNA基因序列分析 | 第29-31页 |
| 1.5 菌株对啶虫脒降解的研究 | 第31-32页 |
| 1.6 菌株的培养和接种 | 第32页 |
| 1.7 菌株D-2对啶虫脒降解特性的研究 | 第32-33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-38页 |
| 2.1 啶虫脒降解菌株的分离与筛选 | 第33页 |
| 2.2 降解菌株D-2的鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3 菌株D-2利用啶虫脒为唯一碳源的降解情况 | 第34-35页 |
| 2.4 培养温度对菌株D-2降解啶虫脒的影响 | 第35页 |
| 2.5 培养基的pH值对菌株D-2降解啶虫脒的影响 | 第35-36页 |
| 2.6 接种量对菌株D-2降解啶虫脒的影响 | 第36页 |
| 2.7 农药的初始浓度对菌株D-2降解啶虫脒的影响 | 第36-37页 |
| 2.8 金属离子对菌株D-2降解啶虫脒的影响 | 第37-38页 |
| 本章讨论 | 第38-39页 |
| 本章小结 | 第39-40页 |
| 第二章 菌株D-2对啶虫脒的代谢途径研究 | 第40-48页 |
| 1 材料与方法 | 第40-41页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第40页 |
| 1.2 菌株的培养和接种 | 第40页 |
| 1.3 菌株D-2降解啶虫脒代谢产物的制备 | 第40页 |
| 1.4 代谢产物的HPLC检测 | 第40页 |
| 1.5 代谢产物的质谱检测分析 | 第40-41页 |
| 1.6 菌株D-2降解啶虫脒过程中的脱氯实验 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-46页 |
| 2.1 菌株D-2对啶虫脒的降解和代谢产物的HPLC检测 | 第41-42页 |
| 2.2 代谢产物的HPLC-ESI-MS和MS-MS检测 | 第42-44页 |
| 2.3 菌株D-2降解啶虫脒过程中的脱氯实验 | 第44页 |
| 2.4 菌株D-2对啶虫脒的降解途径 | 第44-46页 |
| 本章讨论 | 第46-47页 |
| 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 菌株D-2代谢啶虫脒关键酶基因的克隆和功能验证 | 第48-70页 |
| 第一节 菌株D-2代谢啶虫脒关键酶的纯化 | 第48-56页 |
| 1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 1.1 菌株与培养基 | 第48页 |
| 1.2 菌株基因组总DNA提取 | 第48页 |
| 1.3 菌株基因组测序 | 第48-49页 |
| 1.4 菌株D-2的培养和粗酶液的制备 | 第49页 |
| 1.5 酶活测定 | 第49页 |
| 1.6 蛋白含量测定 | 第49页 |
| 1.7 硫酸铵分级沉淀 | 第49-50页 |
| 1.8 Q-Sepharose FF离子柱层析 | 第50页 |
| 1.9 Superdex-200凝胶层析 | 第50页 |
| 1.10 肽指纹图谱鉴定 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-56页 |
| 2.1 菌株基因组总DNA的提取 | 第50-51页 |
| 2.2 基因组组装 | 第51页 |
| 2.3 硫酸铵分级沉淀结果 | 第51-52页 |
| 2.4 初步纯化后的酶液进行Q-Sepharose FF离子柱层析 | 第52页 |
| 2.5 Superdex-200凝胶层析结果 | 第52-54页 |
| 2.6 肽指纹图谱鉴定分析 | 第54-56页 |
| 第二节 菌株D-2啶虫脒酰胺酶基因(ama)的克隆和表达 | 第56-66页 |
| 1 材料与方法 | 第56-61页 |
| 1.1 试剂与培养基 | 第56页 |
| 1.2 菌株、质粒和引物 | 第56页 |
| 1.3 菌株基因组总DNA提取 | 第56-57页 |
| 1.4 ama基因的扩增 | 第57页 |
| 1.5 表达菌株的构建 | 第57-59页 |
| 1.6 重组菌株的诱导表达 | 第59页 |
| 1.7 重组菌株粗酶液的制备 | 第59页 |
| 1.8 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第59-60页 |
| 1.9 啶虫脒酰胺酶Ama的纯化 | 第60页 |
| 1.10 啶虫脒代谢产物的检测 | 第60页 |
| 1.11 啶虫脒酰胺酶Ama的酶学特性研究 | 第60-61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-66页 |
| 2.1 PCR扩增啶虫脒酰胺酶基因ama与表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 2.2 啶虫脒酰胺酶Ama在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第62-63页 |
| 2.3 啶虫脒酰胺酶Ama的酶活测定 | 第63-64页 |
| 2.4 温度对啶虫脒酰胺酶Ama活力和稳定性的影响 | 第64页 |
| 2.5 pH对啶虫脒酰胺酶Ama活力的影响 | 第64-65页 |
| 2.6 金属离子对啶虫脒酰胺酶Ama活力的影响 | 第65-66页 |
| 本章讨论 | 第66-68页 |
| 本章小结 | 第68-70页 |
| 第四章 菌株D-2对土壤中啶虫脒污染修复效应研究 | 第70-96页 |
| 1 材料与方法 | 第70-75页 |
| 1.1 菌株、培养基与农药 | 第70页 |
| 1.2 供试土壤 | 第70页 |
| 1.3 菌悬液的制备 | 第70页 |
| 1.4 实验方法 | 第70-71页 |
| 1.5 啶虫脒的提取及检测 | 第71页 |
| 1.6 啶虫脒标准曲线的制作 | 第71-72页 |
| 1.7 土壤样品采集 | 第72页 |
| 1.8 土壤总DNA的提取 | 第72页 |
| 1.9 测序样品编号说明 | 第72-74页 |
| 1.10 土壤细菌的MiSeq高通量测序 | 第74页 |
| 1.11 MiSeq高通量测序结果的数据分析 | 第74-75页 |
| 1.12 数据统计与分析 | 第75页 |
| 2 结果与分析 | 第75-92页 |
| 2.1 菌株D-2在不同土壤中对不同浓度啶虫脒的去除 | 第75-76页 |
| 2.2 测序结果数据分析统计 | 第76页 |
| 2.3 菌株D-2对啶虫脒污染土壤中的微生物群落结构的影响 | 第76-86页 |
| 2.4 菌株D-2对啶虫脒污染土壤中的微生物群落组成的影响 | 第86-92页 |
| 本章讨论 | 第92-94页 |
| 本章小结 | 第94-96页 |
| 全文总结 | 第96-98页 |
| 博士论文创新点 | 第98-100页 |
| 今后展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-110页 |
| 附录一 文中所用培养基和试剂配方 | 第110-112页 |
| 附录二 菌株D-2的16S rRNA基因序列 | 第112-114页 |
| 附录三 菌株D-2中啶虫脒酰胺酶基因ama | 第114-116页 |
| 攻读博士学位期间已发表论文 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118页 |
