| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-14页 |
| 符号与缩略语说明 | 第15-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-35页 |
| 第一章 百菌清及其异构体的简介以及百菌清在环境中的代谢与转化 | 第17-23页 |
| 1 百菌清及其同分异构体的简介 | 第17-18页 |
| 2 百菌清的主要理化性质与用途 | 第18-19页 |
| 3 百菌清的毒性、残留与检测及其降解行为 | 第19-23页 |
| 第二章 微生物的主要脱卤方式 | 第23-31页 |
| 1 氧化脱卤作用 | 第23-24页 |
| 2 水解脱卤作用 | 第24-26页 |
| 3 巯基取代脱卤作用 | 第26-27页 |
| 4 还原脱卤作用 | 第27-31页 |
| 第三章 微生物降解百菌清的研究进展 | 第31-35页 |
| 第二部分 实验部分 | 第35-125页 |
| 第一章 百菌清及异构体四氯邻苯二甲腈降解菌株的分离鉴定 | 第35-55页 |
| 1 材料与方法 | 第35-39页 |
| 1.1 菌株、培养基 | 第35-36页 |
| 1.2 感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| 1.3 酶连与转化 | 第37页 |
| 1.4 百菌清及其同分异构体降解菌株的分离筛选 | 第37-38页 |
| 1.5 降解菌株的16S rRNA基因序列的测定 | 第38-39页 |
| 1.6 降解菌株系统发育地位的确定 | 第39页 |
| 1.7 降解菌株的生长特征及其生理生化鉴定 | 第39页 |
| 1.8 百菌清、四氯邻苯二甲腈以及四氯对苯二甲腈含量的测定方法 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-51页 |
| 2.1 百菌清及四氯邻苯二甲腈降解菌株的分离、筛选 | 第39-41页 |
| 2.2 降解菌株的菌落形态以及生理生化特征 | 第41-42页 |
| 2.3 降解菌株基因组DNA的提取以及16S rRNA基因的PCR扩增 | 第42页 |
| 2.4 两株降解菌株系统分类地位鉴定 | 第42-46页 |
| 2.5 环境条件对两株降解菌株生长的影响 | 第46-51页 |
| 本章讨论 | 第51-53页 |
| 本章小结 | 第53-55页 |
| 第二章 降解菌株对百菌清与四氯邻苯二甲腈降解特性及途径的研究 | 第55-77页 |
| 第一节 菌株BLM18对百菌清的降解特性及其还原脱卤途径研究 | 第56-61页 |
| 1 材料与方法 | 第56-57页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第56页 |
| 1.2 百菌清含量的检测方法 | 第56页 |
| 1.3 环境条件对菌株BLM18降解百菌清的影响 | 第56页 |
| 1.4 百菌清代谢产物的紫外和液相检测 | 第56页 |
| 1.5 百菌清代谢产物的GC/MS检测 | 第56页 |
| 1.6 降解菌株BLM18的底物谱 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-61页 |
| 2.1 碳源对菌株BLM18降解百菌清的影响 | 第57页 |
| 2.2 温度对菌株BLM18降解百菌清的影响 | 第57-58页 |
| 2.3 初始pH值对菌株BLM18降解百菌清的影响 | 第58-59页 |
| 2.4 添加金属离子对BLM18降解百菌清的影响 | 第59页 |
| 2.5 降解菌株BLM18代谢产物的鉴定及其还原脱氯代谢途径 | 第59-61页 |
| 第二节 降解菌株BSQ-1对四氯邻苯二甲腈的降解特性及其水解脱卤研究 | 第61-73页 |
| 1 材料与方法 | 第61-63页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第61页 |
| 1.2 四氯邻苯二甲腈含量的检测方法 | 第61页 |
| 1.3 环境条件对菌株BSQ-1降解四氯邻苯二甲腈的影响 | 第61页 |
| 1.4 菌株BSQ-1代谢产物的检测方法 | 第61页 |
| 1.5 菌株BSQ-1代谢产物的纯化 | 第61-62页 |
| 1.6 菌株BSQ-1代谢产物的鉴定 | 第62页 |
| 1.7 降解菌BSQ-1的底物谱 | 第62页 |
| 1.8 降解菌BSQ-1的脱卤机制 | 第62-63页 |
| 2 结果与分析 | 第63-73页 |
| 2.1 菌株BSQ-1对四氯邻苯二甲腈的降解特性 | 第63页 |
| 2.2 菌株生长和四氯邻苯二甲腈降解的关系 | 第63-64页 |
| 2.3 碳源对菌株BSQ-1降解四氯邻苯二甲腈的影响 | 第64-65页 |
| 2.4 pH以及温度对菌株BSQ-1降解四氯邻苯二甲腈的影响 | 第65页 |
| 2.5 金属离子对菌株BSQ-1降解四氯邻苯二甲腈的影响 | 第65-66页 |
| 2.6 降解菌株BSQ-1代谢产物的鉴定 | 第66-70页 |
| 2.7 降解菌株BSQ-1的底物谱 | 第70-72页 |
| 2.8 降解菌株BSQ-1粗酶液在厌氧条件下对四氯邻苯二甲腈的脱氯 | 第72-73页 |
| 本章讨论 | 第73-75页 |
| 本章小结 | 第75-77页 |
| 第三章 百菌清及其异构体的脱氯酶研究 | 第77-105页 |
| 第一节 菌株BSQ-1中百菌清及其同分异构体水解脱卤酶的研究 | 第77-82页 |
| 1 材料与方法 | 第77-80页 |
| 1.1 培养基与试剂 | 第77-78页 |
| 1.2 粗酶的获得与浓缩 | 第78页 |
| 1.3 Native-PAGE | 第78页 |
| 1.4 降解菌株BSQ-1脱氯酶基因的扩增 | 第78-79页 |
| 1.5 PCR产物的T/A克隆 | 第79页 |
| 1.6 E.coli DH5α感受态细胞的制备与酶连产物的转化 | 第79页 |
| 1.7 质粒DNA的小量提取 | 第79页 |
| 1.8 Chd酶活力检测 | 第79-80页 |
| 2 结果与分析 | 第80-82页 |
| 2.1 Naive-PAGE | 第80页 |
| 2.2 Native-PAGE凝胶的LC-MS/MS鉴定 | 第80-81页 |
| 2.3 Chd酶活力检测 | 第81-82页 |
| 第二节 百菌清还原脱氯酶的纯化、鉴定及其酶学特性的研究 | 第82-101页 |
| 1 材料与方法 | 第82-88页 |
| 1.1 菌株、培养基 | 第82页 |
| 1.2 菌株DNA的提取与全基因组测序 | 第82-83页 |
| 1.3 粗酶的获得 | 第83页 |
| 1.4 硫酸铵沉淀去除杂蛋白 | 第83页 |
| 1.5 阴离子凝胶交换层析柱 | 第83-84页 |
| 1.6 阳离子凝胶交换层析柱 | 第84页 |
| 1.7 分子筛凝胶层析柱 | 第84页 |
| 1.8 SDS-PAGE凝胶的LC-MS/MS鉴定 | 第84页 |
| 1.9 质粒与PCR片段的酶切与回收 | 第84-85页 |
| 1.10 酶连 | 第85页 |
| 1.11 酶连产物的转化与阳性克隆的筛选 | 第85-86页 |
| 1.12 目的基因表达情况 | 第86-87页 |
| 1.13 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第87页 |
| 1.14 还原酶CpoA的酶学特性研究 | 第87-88页 |
| 2 结果与分析 | 第88-101页 |
| 2.1 菌株BLM18基因组测序结果 | 第88-89页 |
| 2.2 硫酸铵沉淀去除杂蛋白 | 第89页 |
| 2.3 阴离子凝胶交换层析柱 | 第89-90页 |
| 2.4 阳离子凝胶交换层析柱 | 第90-91页 |
| 2.5 分子筛凝胶层析柱 | 第91-92页 |
| 2.6 SDS-PAGE凝胶的LC-MS/MS鉴定 | 第92页 |
| 2.7 目的基因的表达 | 第92-95页 |
| 2.8 还原脱卤酶CpoA的功能验证 | 第95-96页 |
| 2.9 目的基因的纯化分析 | 第96-97页 |
| 2.10 还原脱卤酶CpoA的酶学特性研究 | 第97-101页 |
| 本章讨论 | 第101-103页 |
| 本章小结 | 第103-105页 |
| 第四章 菌株BSQ-1与BLM18在修复百菌清污染土壤中的微生物群落变化研究 | 第105-125页 |
| 1 材料与方法 | 第105-109页 |
| 1.1供试菌株 | 第105页 |
| 1.2 供试土壤 | 第105页 |
| 1.3 供试农药 | 第105页 |
| 1.4 主要试剂 | 第105页 |
| 1.5 实验设计 | 第105-106页 |
| 1.6 菌株的培养及菌悬液的制备 | 第106页 |
| 1.7 土壤总DNA的提取 | 第106页 |
| 1.8 供试土壤的性质 | 第106-107页 |
| 1.9 土壤中百菌清浓度的检测 | 第107页 |
| 1.10 测序样品的准备 | 第107-109页 |
| 2 结果与分析 | 第109-121页 |
| 2.1 土壤中百菌清浓度的检测 | 第109页 |
| 2.2 测序结果统计 | 第109-110页 |
| 2.3 取样深度的判定 | 第110-111页 |
| 2.4 微生物群落结构分析 | 第111-117页 |
| 2.5 样品微生物群落结构相似度分析 | 第117-121页 |
| 本章讨论 | 第121-123页 |
| 本章小结 | 第123-125页 |
| 全文总结 | 第125-127页 |
| 博士论文创新点 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-136页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文目录 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137-139页 |
| 附录一 实验用培养基及分子生物学试剂 | 第139-141页 |
| 附录二 菌株BLM18的16S RRNA基因序列 | 第141-142页 |
| 附录三 菌株BSQ-1的16S RRNA基因序列 | 第142-143页 |
| 附录四 cpoA的基因序列 | 第143页 |
