| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 1 前言 | 第10-16页 |
| 1.1 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第10-11页 |
| 1.1.1 稻瘟病的发生 | 第10页 |
| 1.1.2 稻瘟病菌的侵染循环 | 第10-11页 |
| 1.2 稻瘟病菌与水稻互作的研究 | 第11-14页 |
| 1.2.1 稻瘟病菌的侵染 | 第11-12页 |
| 1.2.2 水稻的抗病反应 | 第12-13页 |
| 1.2.3 稻瘟病菌与水稻之间物质和信号的传输 | 第13-14页 |
| 1.3 己糖载体蛋白 | 第14-16页 |
| 1.3.1 己糖载体蛋白的分类 | 第14页 |
| 1.3.2 己糖载体蛋白的功能研究 | 第14-16页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第16页 |
| 2 材料方法 | 第16-29页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第16-17页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1.1 菌株、质粒与供试植物 | 第16页 |
| 2.1.1.2 培养基 | 第16-17页 |
| 2.1.2 仪器设备和试剂 | 第17页 |
| 2.1.2.1 主要仪器 | 第17页 |
| 2.1.2.2 主要试剂 | 第17页 |
| 2.2 生物信息学分析方法 | 第17-18页 |
| 2.2.1 序列选择和序列比对 | 第17-18页 |
| 2.2.2 系统进化树的建立 | 第18页 |
| 2.2.3 跨膜螺旋结构和结构域分析 | 第18页 |
| 2.2.4 基因表达量分析 | 第18页 |
| 2.2.5 引物设计 | 第18页 |
| 2.3 试验方法 | 第18-26页 |
| 2.3.1 稻瘟病菌的培养 | 第18-19页 |
| 2.3.2 稻瘟病菌核酸的提取 | 第19-20页 |
| 2.3.2.1 稻瘟病菌DNA的提取 | 第19页 |
| 2.3.2.2 稻瘟病菌RNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.3.3 PCR反应 | 第20-22页 |
| 2.3.3.1 普通PCR反应 | 第20页 |
| 2.3.3.2 RT-PCR反应 | 第20-21页 |
| 2.3.3.3 QRT-PCR反应 | 第21页 |
| 2.3.3.4 SOE-PCR方法 | 第21-22页 |
| 2.3.4 稻瘟病菌原生质体的制备与转化 | 第22-23页 |
| 2.3.4.1 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第22-23页 |
| 2.3.4.2 稻瘟病菌的转化 | 第23页 |
| 2.3.4.3 转化子的筛选与验证 | 第23页 |
| 2.3.5 菌稻瘟病菌菌株的保存 | 第23页 |
| 2.3.6 载体的构建 | 第23-26页 |
| 2.3.6.1 大肠杆菌DH 5α的培养 | 第23-24页 |
| 2.3.6.2 DH5 α感受态的制备 | 第24页 |
| 2.3.6.3 细菌转化 | 第24页 |
| 2.3.6.4 质粒的提取 | 第24-25页 |
| 2.3.6.5 酶切反应与连接反应 | 第25-26页 |
| 2.3.7 细菌菌株的保存 | 第26页 |
| 2.3.8 供试植物的栽培 | 第26页 |
| 2.3.8.1 大麦的种植 | 第26页 |
| 2.3.8.2 CO39水稻种子的诱导萌发和幼苗栽培 | 第26页 |
| 2.4 突变体基本表型的分析 | 第26-28页 |
| 2.4.1 菌落的生长与形态观察 | 第26页 |
| 2.4.2 菌丝的形态观察 | 第26页 |
| 2.4.3 分生孢子的产生与萌发 | 第26-27页 |
| 2.4.4 附着胞的诱导及其膨压的检测 | 第27页 |
| 2.4.5 分生孢子隔膜的观察(CFW染色反应) | 第27页 |
| 2.4.6 大麦离体接种实验 | 第27页 |
| 2.4.7 水稻接种实验 | 第27页 |
| 2.4.8 洋葱表皮侵染实验 | 第27-28页 |
| 2.5 基因的功能性分析 | 第28-29页 |
| 2.5.1 四种己糖与基因MoRcO3、MoSnf3的关系 | 第28页 |
| 2.5.1.1 菌落生长形态变化 | 第28页 |
| 2.5.1.2 己糖对基因表达量的影响分析 | 第28页 |
| 2.5.2 基因之间表达量关系检测 | 第28-29页 |
| 2.5.2.1 同源基因MoRco3与MoSrf3的表达量关系 | 第28页 |
| 2.5.2.2 基因MORco3与MoSnf3与糖代谢抑制的关系探索 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-48页 |
| 3.1 生物信息学分析结果 | 第29-35页 |
| 3.1.1 系统进化树的建立 | 第29-32页 |
| 3.1.2 跨膜螺旋结构和结构域分析 | 第32-33页 |
| 3.1.3 稻瘟病菌己糖载体蛋白基因的表达分析 | 第33-35页 |
| 3.1.3.1 稻瘟病菌附着胞形成过程中己糖载体蛋白基因的表达分析 | 第33-34页 |
| 3.1.3.2 稻瘟病菌侵染水稻48h后的己糖载体蛋白基因的表达分析 | 第34-35页 |
| 3.2 MoRcO3突变体的获得及其基本表型分析 | 第35-40页 |
| 3.2.1 基因MoRcO3缺失突变体及互补菌株的获得 | 第35-36页 |
| 3.2.3 MoRcO3基因突变体的表型分析 | 第36-40页 |
| 3.2.3.1 菌落的生长与形态观察 | 第36-37页 |
| 3.2.3.2 菌丝形态检测实验 | 第37-38页 |
| 3.2.3.3 产孢量的统计与分生孢子梗的观察 | 第38页 |
| 3.2.3.4 分生孢子的诱导萌发 | 第38-39页 |
| 3.2.3.5 大麦离体接种 | 第39页 |
| 3.2.3.6 水稻活体接种 | 第39-40页 |
| 3.2.3.7 洋葱表皮侵染 | 第40页 |
| 3.2.3.8 附着胞的诱导及其膨压的检测 | 第40页 |
| 3.3 基因MoRco3过表达突变体的获得 | 第40-43页 |
| 3.3.1 MoRco3基因过表达突变体的基本表型分析 | 第41-43页 |
| 3.3.1.1 菌落形态与生长速率分析 | 第41-42页 |
| 3.3.1.2 产孢量统计 | 第42页 |
| 3.3.1.3 分生孢子诱导与萌发 | 第42-43页 |
| 3.3.2 大麦离体接种实验 | 第43页 |
| 3.3.4 水稻活体接种实验 | 第43页 |
| 3.4 基因MoSnf3缺失突变体的获得及其表型分析 | 第43-48页 |
| 3.4.1 基因MoSnf3缺失突变体的获得 | 第43-44页 |
| 3.4.2 MoSnf3基因突变体的表型分析 | 第44-48页 |
| 3.4.2.1 菌落的生长与形态观察 | 第44-45页 |
| 3.4.2.2 分生孢子的产生与萌发 | 第45-46页 |
| 3.4.2.3 分生孢子CFW染色反应 | 第46-47页 |
| 3.4.2.4 大麦离体接种实验 | 第47页 |
| 3.4.2.5 水稻接种实验 | 第47-48页 |
| 4 基因的功能性分析 | 第48-52页 |
| 4.1 菌落生长形态变化 | 第48-50页 |
| 4.2 糖源对基因MoRcO3与MoSnf3的表达量影响 | 第50-51页 |
| 4.3 两个同源基因之间的表达量关系 | 第51-52页 |
| 4.4 基因MoRcO3与MoSnf3与糖代谢抑制之间的联系 | 第52页 |
| 5 小结与讨论 | 第52-55页 |
| 5.1 稻瘟病菌中己糖载体蛋白的生物信息学分析 | 第52-53页 |
| 5.2 稻瘟病菌中己糖载体蛋白基因的表达量分析 | 第53页 |
| 5.2.1 分生孢子萌发过程基因的表达量分析 | 第53页 |
| 5.2.2 稻瘟病菌侵染水稻过程相关基因表达量 | 第53页 |
| 5.3 突变体的表型性分析 | 第53-54页 |
| 5.4 基因的功能性分析 | 第54-55页 |
| 5.4.1 基因与四种己糖之间的关系 | 第54页 |
| 5.4.2 两个基因之间的关系探索 | 第54页 |
| 5.4.3 两个基因表达量与糖代谢之间的联系 | 第54-55页 |
| 6 展望 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
