| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1.1 农药的危害 | 第12-13页 |
| 1.2 有机磷农药的分类 | 第13页 |
| 1.3 有机磷农药的降解方式 | 第13-15页 |
| 1.3.1 物理降解 | 第13-14页 |
| 1.3.2 化学降解 | 第14-15页 |
| 1.3.3 生物降解 | 第15页 |
| 1.4 降解有机磷农药的微生物种类 | 第15-16页 |
| 1.5 微生物降解有机磷农药的机理 | 第16-17页 |
| 1.6 有机磷农药的降解途径 | 第17-21页 |
| 1.6.1 甲基对硫磷的降解途径 | 第17-18页 |
| 1.6.2 甲胺磷的降解途径 | 第18-19页 |
| 1.6.3 毒死蜱的降解途径 | 第19-20页 |
| 1.6.4 乐果的降解途径 | 第20-21页 |
| 1.6.5 三唑磷的降解途径 | 第21页 |
| 1.7 有机磷酯水解酶基因及其研究进展 | 第21-23页 |
| 1.8 甲基对硫磷水解酶的研究现状 | 第23-26页 |
| 1.9 课题研究意义 | 第26-27页 |
| 第2章 甲基对硫磷降解菌新种的分离鉴定 | 第27-48页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-32页 |
| 2.1.1 菌株、培养基与实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.2 降解菌株的驯化与初筛 | 第28页 |
| 2.1.3 菌株复筛 | 第28页 |
| 2.1.4 降解菌株的培养特征及生理生化鉴定 | 第28页 |
| 2.1.5 降解菌株的保守基因序列的测定与分析 | 第28-29页 |
| 2.1.6 降解菌株系统发育地位的确定 | 第29页 |
| 2.1.7 菌株系统进化树分析 | 第29-30页 |
| 2.1.8 API检测分析 | 第30页 |
| 2.1.9 Biolog检测分析 | 第30-31页 |
| 2.1.10 细胞壁脂肪酸检测 | 第31页 |
| 2.1.11 细胞醌类测定 | 第31页 |
| 2.1.12 细胞极性脂组分分析 | 第31-32页 |
| 2.1.13 G+C mol%与DNA-DNA杂交值测定 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-47页 |
| 2.2.1 甲基对硫磷降解菌的分离筛选 | 第32-33页 |
| 2.2.2 降解菌株MP-1的菌落形态及生理生化特征 | 第33-34页 |
| 2.2.3 降解菌株MP-1的基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.4 降解菌株MP-1的系统发育地位 | 第35-36页 |
| 2.2.5 多基因序列(MLSA)系统发育分析 | 第36-40页 |
| 2.2.6 菌株MP-1的API鉴定结果 | 第40-42页 |
| 2.2.7 菌株MP-1的Biolog鉴定结果 | 第42-43页 |
| 2.2.8 菌株MP-1与相近模式种的生理生化差异总结 | 第43-44页 |
| 2.2.9 细胞脂肪酸分析 | 第44-45页 |
| 2.2.10 菌株醌组分分析 | 第45页 |
| 2.2.11 菌株极性酯组分分析 | 第45-46页 |
| 2.2.12 菌株MP-1的G+C mol%含量和DNA-DNA同源性分析 | 第46页 |
| 2.2.13 新种描述 | 第46-47页 |
| 2.3 本章小结 | 第47-48页 |
| 第3章 菌株MP-1的生长和降解特性研究 | 第48-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-50页 |
| 3.1.1 菌株、培养基与试剂 | 第48页 |
| 3.1.2 菌种制备及菌体生长量的测定方法 | 第48页 |
| 3.1.3 最适生长温度测定 | 第48页 |
| 3.1.4 最适生长pH测定 | 第48页 |
| 3.1.5 最适盐浓度测定 | 第48-49页 |
| 3.1.6 反应液中甲基对硫磷的提取与检测 | 第49页 |
| 3.1.7 pH对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第49页 |
| 3.1.8 温度对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第49页 |
| 3.1.9 盐浓度对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第49页 |
| 3.1.10 接种量对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第49页 |
| 3.1.11 金属离子及EDTA对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第49-50页 |
| 3.1.12 菌株MP-1的降解底物谱 | 第50页 |
| 3.1.13 菌株MP-1降解底物初速率测定 | 第50页 |
| 3.2 结果与分析 | 第50-58页 |
| 3.2.1 最适生长温度 | 第50页 |
| 3.2.2 最适生长pH | 第50-51页 |
| 3.2.3 最适生长盐浓度 | 第51页 |
| 3.2.4 pH对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.5 温度对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.6 盐浓度对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.7 接种量对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第54页 |
| 3.2.8 金属离子及EDTA对菌株MP-1降解甲基对硫磷的影响 | 第54-55页 |
| 3.2.9 菌株MP-1的降解底物谱 | 第55-56页 |
| 3.2.10 菌株MP-1降解底物初速率测定 | 第56-58页 |
| 3.3 本章小结 | 第58-59页 |
| 第4章 有机磷酯水解酶基因的克隆表达与纯化表征 | 第59-79页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-65页 |
| 4.1.1 菌株与培养基 | 第59页 |
| 4.1.2 实验试剂与材料 | 第59-61页 |
| 4.1.3 有机磷酯水解酶基因的克隆与表达 | 第61-63页 |
| 4.1.4 有机磷酯水解酶BjMPH的纯化 | 第63-64页 |
| 4.1.5 有机磷酯水解酶BjMPH的表征 | 第64页 |
| 4.1.6 BjMPH的定点突变 | 第64-65页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第65-78页 |
| 4.2.1 Bjmpd基因的扩增 | 第65页 |
| 4.2.2 重组表达质粒pET28a-BjMPH的构建 | 第65-66页 |
| 4.2.3 有机磷酯水解酶基因Bjmpd的表达 | 第66-67页 |
| 4.2.4 BjMPH的纯化与活力测定 | 第67-68页 |
| 4.2.5 BjMPH的表征 | 第68-71页 |
| 4.2.6 BjMPH的定点及组合突变验证三位点对酶活力的贡献 | 第71-73页 |
| 4.2.7 定点突变提高酶的活力 | 第73-78页 |
| 4.3 本章小结 | 第78-79页 |
| 第5章 有机磷酯水解酶BjMPH对敌敌畏的降解途径研究 | 第79-83页 |
| 5.1 材料与方法 | 第79-80页 |
| 5.1.1 培养基与试剂 | 第79页 |
| 5.1.2 敌敌畏降解代谢产物的检测 | 第79-80页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第80-82页 |
| 5.2.1 反应进程曲线 | 第80页 |
| 5.2.2 代谢产物GC-MS检测 | 第80-81页 |
| 5.2.3 代谢途径推测 | 第81-82页 |
| 5.3 本章小结 | 第82-83页 |
| 结论和展望 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-92页 |
| 附录 | 第92-93页 |
| 硕士在读期间撰写的论文和专利 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
