| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第19-37页 |
| 1.1 引言 | 第19-20页 |
| 1.2 木糖磷酸化代谢方式及利用现状的研究进展 | 第20-23页 |
| 1.3 构建木糖非磷酸化代谢平台生产高附加值产物 | 第23-29页 |
| 1.3.1 木糖的非磷酸化代谢方式 | 第23-24页 |
| 1.3.2 木糖的非磷酸化代谢途径的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.3.3 3-羟基-γ-丁内酯和3,4-二羟基丁酸的商业价值及生产现状 | 第25-27页 |
| 1.3.4 1,4-丁二醇的商业价值及生产现状 | 第27-28页 |
| 1.3.5 戊二酸的商业价值及生产现状 | 第28-29页 |
| 1.4 改造大肠杆菌莽草酸途径生产高附加值酚类化合物 | 第29-34页 |
| 1.4.1 大肠杆菌莽草酸途径 | 第30-32页 |
| 1.4.2 焦性没食子酸的商业价值和生产现状 | 第32-33页 |
| 1.4.3 水杨醇和龙胆醇的商业价值和生产现状 | 第33-34页 |
| 1.5 本论文的立题目的及研究意义 | 第34-35页 |
| 1.6 本论文的研究内容与方法 | 第35-37页 |
| 第二章 改造木糖非磷酸化代谢途径生物合成3,4-二羟基丁酸 | 第37-55页 |
| 2.1 引言 | 第37-38页 |
| 2.2 实验材料和实验方法 | 第38-43页 |
| 2.2.1 培养基、菌株和质粒 | 第38页 |
| 2.2.2 质粒构建 | 第38-41页 |
| 2.2.3 蛋白质表达与纯化 | 第41页 |
| 2.2.4 体外酶活测试 | 第41-42页 |
| 2.2.5 大肠杆菌发酵生产3,4-DHBA | 第42-43页 |
| 2.2.6 代谢物分析 | 第43页 |
| 2.3 结果分析 | 第43-52页 |
| 2.3.1 设计3,4-DHBA的人造生物合成途径 | 第43-45页 |
| 2.3.2 研究及表征新途径中涉及的酶 | 第45-46页 |
| 2.3.3 利用木糖从头合成3,4-DHBA | 第46-48页 |
| 2.3.4 筛选和鉴定高效的3,4-二羟基丁醛脱氢酶以实现3,4-DHBA高产 | 第48-50页 |
| 2.3.5 敲除竞争性途径以优化3,4-DHBA的生产 | 第50-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-55页 |
| 第三章 理性改造二醇脱水酶实现1,4-丁二醇的生物合成 | 第55-75页 |
| 3.1 引言 | 第55-56页 |
| 3.2 实验材料和实验方法 | 第56-61页 |
| 3.2.1 化学品和试剂 | 第56页 |
| 3.2.2 菌种和质粒 | 第56页 |
| 3.2.3 质粒构建 | 第56-57页 |
| 3.2.4 培养基 | 第57页 |
| 3.2.5 全细胞生物催化 | 第57-60页 |
| 3.2.6 体外耦合酶活测试 | 第60页 |
| 3.2.7 从头合成1,4-丁二醇 | 第60页 |
| 3.2.8 代谢物分析 | 第60-61页 |
| 3.2.9 计算机分析和模拟 | 第61页 |
| 3.3 结果分析 | 第61-74页 |
| 3.3.1 检测原始二醇脱水酶对于1,2,4-BTO的活性 | 第61-62页 |
| 3.3.2 提高酶对于底物抑制的相容性 | 第62-64页 |
| 3.3.3 提高酶对于底物分子大小的相容性 | 第64-66页 |
| 3.3.4 优化01-M离子距离提高酶对于1,2,4-BTO的活性 | 第66-71页 |
| 3.3.5 以木糖为底物从头合成1,4-BDO | 第71-74页 |
| 3.4 讨论 | 第74-75页 |
| 第四章 探索木糖代谢途径间协同效应对合成戊二酸的影响 | 第75-89页 |
| 4.1 引言 | 第75-76页 |
| 4.2 实验材料和实验方法 | 第76-79页 |
| 4.2.1 培养基、菌株和质粒 | 第76页 |
| 4.2.2 质粒构建 | 第76-79页 |
| 4.2.3 大肠杆菌从头合成戊二酸 | 第79页 |
| 4.2.4 代谢物分析 | 第79页 |
| 4.3 结果分析 | 第79-86页 |
| 4.3.1 探究不同木糖代谢途径生产戊二酸的能力 | 第79-82页 |
| 4.3.2 探究不同木糖代谢途径之间的协同效应 | 第82-84页 |
| 4.3.3 优化不同木糖代谢途径之间的协同效应 | 第84-86页 |
| 4.4 讨论 | 第86-89页 |
| 第五章 基于苯酚羟基化酶的焦性没食子酸的生物合成 | 第89-101页 |
| 5.1 引言 | 第89-90页 |
| 5.2 实验材料和实验方法 | 第90-93页 |
| 5.2.1 培养基、菌株和质粒 | 第90-91页 |
| 5.2.2 质粒构建 | 第91页 |
| 5.2.3 体外粗酶活测定 | 第91-92页 |
| 5.2.4 饲喂实验 | 第92页 |
| 5.2.5 从头合成焦性没食子酸 | 第92页 |
| 5.2.6 代谢物分析 | 第92-93页 |
| 5.3 结果分析 | 第93-99页 |
| 5.3.1 探究PHQ在PH催化过程的作用 | 第93-95页 |
| 5.3.2 探究PH的底物谱 | 第95-98页 |
| 5.3.3 利用PH的混杂性构建全新的焦性没食子酸生物合成途径 | 第98-99页 |
| 5.4 讨论 | 第99-101页 |
| 第六章 基于水杨酸单加氧酶的焦性没食子酸的生物合成 | 第101-119页 |
| 6.1 引言 | 第101-102页 |
| 6.2 实验材料和实验方法 | 第102-107页 |
| 6.2.1 培养基、菌株和质粒 | 第102-105页 |
| 6.2.2 质粒构建 | 第105页 |
| 6.2.3 体外粗酶活鉴定2,3-DHBA-1-单加氧酶 | 第105页 |
| 6.2.4 体外纯化酶活测定NahG的酶学常数 | 第105-106页 |
| 6.2.5 饲喂实验 | 第106页 |
| 6.2.6 从头合成焦性没食子酸 | 第106页 |
| 6.2.7 代谢物分析 | 第106-107页 |
| 6.3 结果分析 | 第107-117页 |
| 6.3.1 设计一条全新的合成焦性没食子酸的生物途径 | 第107-109页 |
| 6.3.2 鉴定和表征高效的2,3-DHBA-1-单加氧酶 | 第109-111页 |
| 6.3.3 增强途径碳代谢流以高效生产焦性没食子酸 | 第111-114页 |
| 6.3.4 通过模块优化来提高产量 | 第114-116页 |
| 6.3.5 缓解焦性没食子酸的自氧化来提高产量 | 第116-117页 |
| 6.4 讨论 | 第117-119页 |
| 第七章 代谢工程大肠杆菌生物合成水杨醇和龙胆醇 | 第119-131页 |
| 7.1 引言 | 第119页 |
| 7.2 实验材料和实验方法 | 第119-123页 |
| 7.2.1 培养基、菌株和质粒 | 第119-121页 |
| 7.2.2 化学合成龙胆醇 | 第121-122页 |
| 7.2.3 质粒构建 | 第122页 |
| 7.2.4 饲喂实验 | 第122页 |
| 7.2.5 从头合成水杨醇和龙胆醇及代谢物分析 | 第122-123页 |
| 7.3 结果分析 | 第123-130页 |
| 7.3.1 由水杨酸和龙胆酸合成水杨醇和龙胆醇 | 第123-125页 |
| 7.3.2 由水杨酸合成龙胆酸和龙胆醇 | 第125-127页 |
| 7.3.3 构建从头合成水杨醇和龙胆醇的途径 | 第127-130页 |
| 7.4 讨论 | 第130-131页 |
| 第八章 结论与展望 | 第131-135页 |
| 8.1 本研究的主要结论及展望 | 第131-132页 |
| 8.2 创新点 | 第132-135页 |
| 附录 | 第135-139页 |
| 附录A | 第135-138页 |
| 附录B | 第138-139页 |
| 参考文献 | 第139-159页 |
| 致谢 | 第159-161页 |
| 研究成果及发表的论文 | 第161-163页 |
| 作者及导师简介 | 第163-164页 |
| 附件 | 第164-165页 |
