| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 烟曲霉及其致病性 | 第13-14页 |
| 1.2 三唑类抗真菌药物及其抗药性 | 第14-15页 |
| 1.3 烟曲霉抗药性机制 | 第15-17页 |
| 1.3.1 cyp51A基因突变 | 第15页 |
| 1.3.2 非cyp51A基因突变 | 第15-17页 |
| 1.4 烟曲霉抗性获得途径 | 第17-19页 |
| 1.5 本研究的提出和意义 | 第19-21页 |
| 第2章 戊唑醇诱导的烟曲霉对药物的抗性 | 第21-35页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.2.1 药品和试剂 | 第21页 |
| 2.2.2 仪器和设备 | 第21-22页 |
| 2.2.3 培养基 | 第22页 |
| 2.2.4 菌种 | 第22页 |
| 2.3 实验方法 | 第22-28页 |
| 2.3.1 烟曲霉菌株的分离与鉴定 | 第22-25页 |
| 2.3.2 戊唑醇诱导烟曲霉抗性实验 | 第25-26页 |
| 2.3.3 诱导后烟曲霉菌株对伏立康唑、伊曲康唑的MIC变化 | 第26-27页 |
| 2.3.4 诱导菌株cyp51A基因的变化 | 第27-28页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第28-34页 |
| 2.4.1 烟曲霉的鉴定 | 第28-32页 |
| 2.4.2 戊唑醇诱导烟曲霉抗性 | 第32页 |
| 2.4.3 诱导抗性菌株cyp51A基因的变化 | 第32-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 第3章 CYP51A基因TR_(46)/Y121F/T289A突变与烟曲霉抗性的关系 | 第35-49页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 实验材料 | 第35-37页 |
| 3.2.1 化学试剂与抗生素 | 第35-36页 |
| 3.2.2 仪器和设备 | 第36页 |
| 3.2.3 培养基和缓冲液 | 第36-37页 |
| 3.2.4 质粒和菌种 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-45页 |
| 3.3.1 载体构建流程示意 | 第38-39页 |
| 3.3.2 构建中间载体质粒pBC-hygro-cyp51A | 第39-42页 |
| 3.3.3 表达载体pBC-hygro-cypbox的构建 | 第42页 |
| 3.3.4 烟曲霉电击转化试验 | 第42-43页 |
| 3.3.5 烟曲霉转化子的鉴定与分析 | 第43页 |
| 3.3.6 转化子的MIC变化和cyp51A序列测序 | 第43-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-48页 |
| 3.4.1 构建中间载体质粒pBC-hygro-cyp51A | 第45-46页 |
| 3.4.2 表达载体pBC-hygro-cypbox的构建 | 第46-47页 |
| 3.4.3 烟曲霉转化子的鉴定与分析 | 第47-48页 |
| 3.4.4 转化子的MIC变化 | 第48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 第4章 烟曲霉抗性菌株CYP51A基因表达变化 | 第49-58页 |
| 4.1 引言 | 第49页 |
| 4.2 实验材料 | 第49-50页 |
| 4.2.1 菌株 | 第49页 |
| 4.2.2 仪器 | 第49-50页 |
| 4.3 实验方法 | 第50-52页 |
| 4.3.1 总RNA的提取及完整性检测 | 第50页 |
| 4.3.2 RNA的反转录及验证 | 第50-51页 |
| 4.3.3 荧光定量法测定烟曲霉抗性菌株和敏感菌株cyp51A基因的变化 | 第51-52页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第52-56页 |
| 4.4.1 RNA样品质量检测 | 第52-53页 |
| 4.4.2 内参基因片段的普通PCR扩增 | 第53-54页 |
| 4.4.3 目的基因引物的选择 | 第54页 |
| 4.4.4 Cyp51A基因的荧光定量PCR分析 | 第54-56页 |
| 4.5 小结 | 第56-58页 |
| 第5章 抗药性与代谢作用的相关性及其遗传稳定性 | 第58-66页 |
| 5.1 引言 | 第58页 |
| 5.2 试验材料 | 第58-59页 |
| 5.2.1 药品和试剂 | 第58页 |
| 5.2.2 仪器和设备 | 第58-59页 |
| 5.2.3 培养基和缓冲液 | 第59页 |
| 5.3 实验方法 | 第59-61页 |
| 5.3.1 抗性烟曲霉菌株对伏立康唑的代谢 | 第59-61页 |
| 5.3.2 恢复敏感性 | 第61页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第61-64页 |
| 5.4.1 烟曲霉对伏立康唑的代谢 | 第61-64页 |
| 5.4.2 恢复敏感性 | 第64页 |
| 5.5 小结 | 第64-66页 |
| 第6章 结论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-79页 |
| 攻读硕士学位期间主要的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
