| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-19页 |
| 1.材料 | 第19-25页 |
| 1.1 主要材料试剂 | 第19-20页 |
| 1.2 试剂配制 | 第20-23页 |
| 1.3 仪器设备 | 第23-25页 |
| 2.实验方法 | 第25-39页 |
| 2.1 细胞培养实验 | 第25-26页 |
| 2.1.1 细胞生长条件 | 第25页 |
| 2.1.2 细胞复苏 | 第25页 |
| 2.1.3 细胞传代 | 第25页 |
| 2.1.4 细胞冻存 | 第25-26页 |
| 2.2 细胞中总RNA的提取及定量 | 第26页 |
| 2.3 反转录PCR合成CDNA第一链 | 第26-27页 |
| 2.4 TOP10感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.5 PTEN-PCDNA3.1(-)质粒和PTEN-PGEX-6P-1 质粒的构建 | 第27-31页 |
| 2.5.1 引物设计及目的基因CDS区扩增 | 第27-28页 |
| 2.5.2 胶回收目的基因 | 第28-29页 |
| 2.5.3 目的基因两端加A | 第29页 |
| 2.5.4 连接pGEM-T easy Vector | 第29页 |
| 2.5.5 转化Top10感受态进行蓝白班筛选 | 第29页 |
| 2.5.6 质粒的提取 | 第29-30页 |
| 2.5.7 酶切鉴定及测序正确后亚克隆至目的载体pcDNA3.1(-) 和载体pGEX-6p-1.16 | 第30-31页 |
| 2.6 慢病毒实验 | 第31-32页 |
| 2.6.1 送公司包装PTEN过表达和干扰慢病毒 | 第31页 |
| 2.6.2 慢病毒滴度检测实验 | 第31页 |
| 2.6.3 慢病毒感染实验 | 第31-32页 |
| 2.7 测定细胞生长曲线 | 第32页 |
| 2.8 人RTK磷酸化抗体芯片检测 | 第32页 |
| 2.9 血清刺激实验 | 第32页 |
| 2.10 WESTERN-BLOT | 第32-35页 |
| 2.10.1 蛋白样品的收集 | 第32-33页 |
| 2.10.2 BCA法测蛋白浓度 | 第33页 |
| 2.10.3 Western-blot实验 | 第33-35页 |
| 2.11免疫共沉淀实验 | 第35页 |
| 2.12 GST-PULLDOWN验证PTEN与MEK5、ERK5的结合 | 第35-39页 |
| 3.实验结果 | 第39-53页 |
| 3.1 PTEN-PGEX-6P-1 原核表达质粒和PTEN-PCDNA3.1(-)过表达质粒构建结果 | 第39-40页 |
| 3.2 慢病毒感染实验结果 | 第40-41页 |
| 3.3 细胞生长曲线实验结果 | 第41-42页 |
| 3.4 PTEN过表达和沉默后ERK5上游各因子磷酸化水平的检测 | 第42-43页 |
| 3.5 免疫共沉淀实验结果 | 第43-44页 |
| 3.6 PTEN去磷酸化作用WESTERN-BLOT检测实验 | 第44-46页 |
| 3.7 GST-PTEN优化诱导表达及纯化实验结果 | 第46-48页 |
| 3.8 GST-pulldown 实验结果 | 第48-49页 |
| 3.9 人RTK磷酸化抗体芯片检测实验结果 | 第49-53页 |
| 4.讨论 | 第53-57页 |
| 5.结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 综述 | 第63-79页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第81-82页 |
