| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-7页 |
| 1 引言 | 第17-28页 |
| 1.1 概述 | 第17-18页 |
| 1.2 GHRL基因及蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.1 GHRL基因结构及多态性 | 第18页 |
| 1.2.2 GHRL蛋白的结构 | 第18-19页 |
| 1.2.3 GHRL蛋白的活化 | 第19页 |
| 1.3 GHRL的生物学效应 | 第19-21页 |
| 1.3.1 促进生长激素(GH)的分泌 | 第19-20页 |
| 1.3.2 调节摄食和能量代谢 | 第20页 |
| 1.3.3 对胃肠的影响 | 第20页 |
| 1.3.4 影响神经内分泌 | 第20-21页 |
| 1.3.5 对生殖功能的影响 | 第21页 |
| 1.3.6 对机体免疫和肿瘤的影响 | 第21页 |
| 1.3.7 对心血管功能的影响 | 第21页 |
| 1.3.8 其他生物学功能 | 第21页 |
| 1.4 GHRL的组织分布 | 第21-22页 |
| 1.4.1 GHRL在胃和肠中的分布 | 第22页 |
| 1.4.2 GHRL在脑和垂体中分布 | 第22页 |
| 1.4.3 GHRL在其他组织中的分布 | 第22页 |
| 1.5 17-β雌二醇与GHRL表达的关系 | 第22-23页 |
| 1.6 雌激素的作用机制 | 第23-26页 |
| 1.6.1 雌激素的生理功能 | 第23页 |
| 1.6.2 雌激素作用途径 | 第23-24页 |
| 1.6.3 雌激素的调控机制 | 第24-25页 |
| 1.6.4 ERK信号通路研究进展 | 第25-26页 |
| 1.7 多囊卵巢综合征(PCOS)与GHRL | 第26-27页 |
| 1.8 本研究问题的提出与意义 | 第27-28页 |
| 2 GHRL和PCOS风险之间的相关性统计分析研究 | 第28-38页 |
| 2.1 材料和方法 | 第28-29页 |
| 2.1.1 文献检索 | 第28页 |
| 2.1.2 用于分析的文献选择标准 | 第28-29页 |
| 2.1.3 数据抽样 | 第29页 |
| 2.1.4 符合标准的论文,其文献涉及到的研究质量评估 | 第29页 |
| 2.1.5 统计方法 | 第29页 |
| 2.2 结果 | 第29-36页 |
| 2.2.1 文献检索与文献涉及到的研究特征 | 第29-34页 |
| 2.2.2 Meta分析 | 第34-36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-37页 |
| 2.4 小结 | 第37-38页 |
| 3 绵羊输卵管上皮细胞的培养、鉴定及上皮细胞中GHRL、GPER、ERα、ERβ、β-actin基因表达研究 | 第38-60页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第38页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第38-39页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第39-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-49页 |
| 3.2.1 绵羊输卵管上皮细胞培养 | 第41页 |
| 3.2.2 细胞的冷冻保存 | 第41-42页 |
| 3.2.3 绵羊输卵管上皮细胞的解冻复苏 | 第42页 |
| 3.2.4 MTT法测定绵羊输卵管上皮细胞生长曲线 | 第42页 |
| 3.2.5 绵羊输卵管上皮细胞的免疫荧光鉴定 | 第42-43页 |
| 3.2.6 培养的细胞上皮标志蛋白E-cadherin及GPER的Westernblot鉴定 | 第43-45页 |
| 3.2.7 绵羊输卵管上皮细胞内GPER及雌激素受体ER基因的检测 | 第45-48页 |
| 3.2.8 免疫组化法检测绵羊输卵管组织中Ea、Eβ、GRPL蛋白的表达方法 | 第48-49页 |
| 3.2.9 免疫组化法检测绵羊输卵管组织中GPER蛋白的表达 | 第49页 |
| 3.3 实验结果 | 第49-57页 |
| 3.3.1 绵羊输卵管上皮细胞培养 | 第49-52页 |
| 3.3.2 绵羊输卵管上皮细胞鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.3 绵羊输卵管上皮细胞总RNA检测结果 | 第53页 |
| 3.3.4 绵羊输卵管上皮细胞饥饿素(Ghrelin)受体(GPER)、雌激素受体(ERα)、雌激素受体(ERβ)cDNA克隆与序列验证和WesternBlot检测 | 第53-55页 |
| 3.3.5 绵羊输卵管GHRL免疫组织化学定位 | 第55-56页 |
| 3.3.6 绵羊输卵管胃饥饿素(GPER)、雌激素受体ERα及ERβ蛋白表达定位结果 | 第56-57页 |
| 3.4 讨论 | 第57-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 4 17-β雌二醇、G1诱导绵羊输卵管上皮细胞内胃饥饿素GHRL基因、PCNA基因表达研究 | 第60-73页 |
| 4.1 材料 | 第60页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第60页 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 | 第60页 |
| 4.2 实验方法 | 第60-63页 |
| 4.2.1 细胞培养与细胞传代 | 第60页 |
| 4.2.2 绵羊输卵管上皮细胞内GHRL、PCNA、β-Actin基因的检测 | 第60-62页 |
| 4.2.3 17-β雌二醇和G1对绵羊输卵管上皮细胞GHRL基因和PCNA基因表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.2.4 各处理组细胞GHRL或PCNA表达水平的RT-qPCR方法检测 | 第63页 |
| 4.3 实验结果 | 第63-71页 |
| 4.3.1 绵羊输卵管上皮细胞总RNA检测结果 | 第63页 |
| 4.3.2 绵羊输卵管上皮细胞内GHRL基因、β-actin基因及PCNA基因RT-qPCR扩增产物电泳结果及测序结果 | 第63-68页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR扩增产物序列的测定结果 | 第68页 |
| 4.3.4 E2和G-1对绵羊输卵管上皮细胞GHRL基因表达的影响 | 第68-70页 |
| 4.3.5 E2对绵羊输卵管上皮细胞PCNA基因表达的影响 | 第70-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-73页 |
| 5 MAPK∕ERK信号通路在E2调节绵羊输卵管上皮细胞GHRL基因表达过程中的作用 | 第73-80页 |
| 5.1 材料 | 第73-74页 |
| 5.1.1 研究材料 | 第73页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第73-74页 |
| 5.2 实验方法 | 第74页 |
| 5.2.1 绵羊输卵管上皮细胞的原代和传代培养 | 第74页 |
| 5.2.2 单独或者混合添加E2、G-1、U0126等分别对细胞处理,研究信号通路 | 第74页 |
| 5.2.3 免疫组化法检测绵羊输卵管ERK1/2蛋白的表达定位 | 第74页 |
| 5.2.4 各处理组细胞GHRL、β-actin提取及表达水平的实时荧光定量PCR方法检测 | 第74页 |
| 5.2.5 Westernblot | 第74页 |
| 5.2.6 数据统计分析 | 第74页 |
| 5.3 实验结果 | 第74-77页 |
| 5.3.1 17-β雌二醇对ERK通路的影响 | 第74-76页 |
| 5.3.2 绵羊输卵管ERK1/2蛋白的表达定位 | 第76-77页 |
| 5.3.3 MAPK/ERK通路阻断试验,验证ERK1/2的作用 | 第77页 |
| 5.4 讨论 | 第77-79页 |
| 5.5 小结 | 第79-80页 |
| 6 全文结论 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-96页 |
| 作者简介 | 第96页 |
