| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 主要符号对照表 | 第11-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-24页 |
| 1.1 溶栓剂 | 第13-18页 |
| 1.1.1 血栓形成及溶栓机制 | 第13-14页 |
| 1.1.2 溶栓剂的研究历史 | 第14-18页 |
| 1.2 海洋来源的溶栓剂 | 第18-19页 |
| 1.2.1 绿藻溶栓酶 | 第18页 |
| 1.2.2 海洋假单胞菌碱性蛋白酶 | 第18页 |
| 1.2.3 单环刺螠溶栓酶 | 第18页 |
| 1.2.4 海洋溶栓剂的研究策略与展望 | 第18-19页 |
| 1.3 海洋无脊椎动物方格星虫的相关研究 | 第19-20页 |
| 1.3.1 方格星虫的生物学特性 | 第19-20页 |
| 1.3.2 方格星虫的研究现状 | 第20页 |
| 1.4 CYGB的简介 | 第20-21页 |
| 1.5 表达系统 | 第21-22页 |
| 1.5.1 表达宿主细胞 | 第21-22页 |
| 1.5.2 表达载体 | 第22页 |
| 1.6 本课题的来源、研究思路与内容 | 第22-24页 |
| 1.6.1 本课题的来源与研究意义 | 第22-23页 |
| 1.6.2 本课题的研究思路 | 第23页 |
| 1.6.3 本课题的主要内容 | 第23-24页 |
| 第2章 重组PL的分离纯化及酶学性质研究 | 第24-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-28页 |
| 2.1.1 实验试剂与耗材 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第25-27页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第27-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-33页 |
| 2.2.1 蛋白PL发酵过程条件优化 | 第28-29页 |
| 2.2.2 纤维蛋白平板法测定纤溶活力 | 第29-30页 |
| 2.2.3 蛋白PL的纯化 | 第30-32页 |
| 2.2.4 蛋白PL的酶学性质研究 | 第32-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-40页 |
| 2.3.1 蛋白PL发酵过程条件优化 | 第33-35页 |
| 2.3.2 蛋白PL的纯化 | 第35-38页 |
| 2.3.3 蛋白PL的酶学性质研究 | 第38-40页 |
| 2.4 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 2.4.1 小结 | 第40页 |
| 2.4.2 讨论 | 第40-41页 |
| 第3章 重组CYGB-PL的分离纯化及酶学性质研究 | 第41-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验试剂与耗材 | 第41-42页 |
| 3.1.2 主要实验仪器 | 第42页 |
| 3.1.3 试剂配制 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 发酵罐技术制备CYGB-PL | 第42页 |
| 3.2.2 BandScan分析目的蛋白的表达量 | 第42页 |
| 3.2.3 蛋白CYGB-PL的纯化 | 第42-45页 |
| 3.2.4 蛋白CYGB-PL的酶学性质研究 | 第45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-53页 |
| 3.3.1 蛋白CYGB-PL发酵过程条件优化 | 第45-46页 |
| 3.3.2 蛋白PL和蛋白CYGB-PL的表达对比 | 第46-48页 |
| 3.3.3 蛋白CYGB-PL的纯化 | 第48-51页 |
| 3.3.4 蛋白CYGB-PL的酶学性质研究 | 第51-53页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第53-55页 |
| 3.4.1 小结 | 第53页 |
| 3.4.2 讨论 | 第53-55页 |
| 第4章 重组CYGB-PL-His在毕赤酵母中构建与表达 | 第55-66页 |
| 4.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 4.1.1 实验试剂与耗材 | 第55-56页 |
| 4.1.2 主要实验仪器 | 第56页 |
| 4.1.3 试剂配制 | 第56页 |
| 4.2 实验步骤 | 第56-58页 |
| 4.2.1 质粒小量提取 | 第56页 |
| 4.2.2 琼脂糖核酸电泳 | 第56-57页 |
| 4.2.3 小量琼脂糖凝胶回收 | 第57页 |
| 4.2.4 热激转化步骤 | 第57页 |
| 4.2.5 酵母感受态的制备 | 第57-58页 |
| 4.2.6 电击转化GS115 | 第58页 |
| 4.3 实验方法 | 第58-62页 |
| 4.3.1 重组载体pPIC9-CYGB-PL-His的构建 | 第58-61页 |
| 4.3.2 毕赤酵母工程菌株GS115-CYGB-PL-His的构建 | 第61-62页 |
| 4.4 结果与分析 | 第62-65页 |
| 4.4.1 pPIC9-CYGB-PL-His质粒的鉴定 | 第62-63页 |
| 4.4.2 GS115-CYGB-PL-His的构建与鉴定 | 第63页 |
| 4.4.3 CYGB-PL-His的表达与活性的鉴定 | 第63-65页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第65-66页 |
| 4.5.1 小结 | 第65页 |
| 4.5.2 讨论 | 第65-66页 |
| 第5章 重组蛋白PL、CYGB-PL的体内外溶栓实验 | 第66-78页 |
| 5.1 实验材料 | 第66-67页 |
| 5.1.1 实验试剂与耗材 | 第66页 |
| 5.1.2 主要实验仪器 | 第66页 |
| 5.1.3 试剂配制 | 第66-67页 |
| 5.2 实验方法 | 第67-69页 |
| 5.2.1 对纤溶酶原的激活作用 | 第67页 |
| 5.2.2 对纤维蛋白原的作用方式 | 第67-68页 |
| 5.2.3 体外溶栓实验 | 第68页 |
| 5.2.4 体内溶栓实验 | 第68-69页 |
| 5.3 结果与分析 | 第69-76页 |
| 5.3.1 对纤溶酶原的激活作用 | 第69-70页 |
| 5.3.2 对纤维蛋白原的作用方式 | 第70-71页 |
| 5.3.3 体外溶栓实验 | 第71-73页 |
| 5.3.4 体内溶栓实验 | 第73-76页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第76-78页 |
| 5.4.1 小结 | 第76页 |
| 5.4.2 讨论 | 第76-78页 |
| 第6章 结论 | 第78-80页 |
| 6.1 研究总结 | 第78-79页 |
| 6.2 需进一步开展的研究 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第87页 |
