| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-19页 |
| 1.1 胚胎干细胞的建立 | 第12-13页 |
| 1.2 猪胚胎干细胞的研究进展 | 第13页 |
| 1.3 诱导多能性干细胞的建立 | 第13-14页 |
| 1.4 猪诱导多能性干细胞的建立 | 第14-18页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 实验动物和材料 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第19-20页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第20-21页 |
| 2.1.4 常用试剂及配制 | 第21-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第23-25页 |
| 2.2.2 病毒包装 | 第25-26页 |
| 2.2.3 iPS细胞的诱导 | 第26页 |
| 2.2.4 多能性细胞的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.5 猪体细胞核移植的主要步骤 | 第27-28页 |
| 2.2.6 孤雌和体外受精胚胎体外培养 | 第28页 |
| 2.2.7 其它实验方法 | 第28-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-48页 |
| 3.1 Nr5a2和Tbx3在猪诱导多能性干细胞中的重要作用 | 第30-35页 |
| 3.1.1 Nr5a2和Tbx3能够改善猪iPSCs的获得 | 第30-31页 |
| 3.1.2 猪iPSCs多能性的鉴定 | 第31-33页 |
| 3.1.3 来源于Nr5a2和Tbx3的猪iPSCs在形态上更类似于小鼠胚胎干细胞 | 第33-35页 |
| 3.2 Nr5a2和Tbx3能够通过抑制RHO-ROCK-MLC信号通路来改善piPSCs的单细胞消化后的活力 | 第35-39页 |
| 3.2.1 通过添加Y27632能够改善4F piPSCs的单细胞消化后的活力 | 第35页 |
| 3.2.2 4FpiPSCs单细胞消化后RHO-ROCK-MLC信号通路被激活 | 第35-38页 |
| 3.2.3 Nr5a2和Tbx3能够改善4F piPSCs的单细胞消化后的活力 | 第38-39页 |
| 3.3 减少转录因子诱导猪iPSCs | 第39-42页 |
| 3.3.1 两个或单个转录因子结合诱导猪iPSCs | 第39-41页 |
| 3.3.2 减因子获得的猪iPSCs的多能性鉴定 | 第41页 |
| 3.3.3 减因子获得的猪iPSCs对外源基因的依赖性 | 第41-42页 |
| 3.4 同一猪成纤维细胞的iPSCs诱导效率和核移植效率具有正相关性 | 第42-48页 |
| 3.4.1 不同胎儿来源的成纤维细胞的iPSCs诱导效率不一样 | 第42-43页 |
| 3.4.2 获得的猪iPSCs的特性 | 第43-44页 |
| 3.4.3 猪iPSCs的多能性鉴定 | 第44-45页 |
| 3.4.4 不同个体来源的PEF的核移植效率不一样,并且与piPSCs的诱导效率呈正相关 | 第45-46页 |
| 3.4.5 猪种内不同的piPSCs的核移植效率趋于一致 | 第46页 |
| 3.4.6 piPSCs的核移植胚胎中外源基因持续表达 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 Nr5a2和Tbx3改变了猪piPSCs的生长特性 | 第48页 |
| 4.2 减少转录因子在猪iPSCs中的可行性 | 第48-49页 |
| 4.3 RHO-ROCK-MLC信号通路在piPSCs中的作用 | 第49页 |
| 4.4 Nr5a2和Tbx3在猪胚胎干细胞建立中可能存在的作用 | 第49-50页 |
| 4.5 iPSC诱导效率与核移植效率的相关性探索 | 第50-51页 |
| 4.6 piPSC核移植效率低的原因探索 | 第51-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-63页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第63页 |
