| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第15-26页 |
| 1.1 阿维菌素应用与环境污染 | 第15-16页 |
| 1.2 AVMs毒理学研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 神经递质与AVMs毒理学 | 第16页 |
| 1.2.2 氧化应激与AVMs毒理学 | 第16-17页 |
| 1.2.3 细胞凋亡与AVMs毒理学 | 第17-18页 |
| 1.2.4 细胞色素P450(CYP 450)与AVMs毒理学 | 第18页 |
| 1.3 细胞凋亡与神经系统疾病 | 第18-19页 |
| 1.4 α-突触核蛋白及其神经细胞毒性作用 | 第19-22页 |
| 1.4.1 α-突触核蛋白 | 第19-20页 |
| 1.4.2 α-Syn可诱导细胞凋亡 | 第20页 |
| 1.4.3 α-Syn影响囊泡运输 | 第20页 |
| 1.4.4 α-Syn的生物膜毒性 | 第20页 |
| 1.4.5 α-Syn的线粒体毒性 | 第20-21页 |
| 1.4.6 α-Syn的溶酶体和蛋白酶体毒性 | 第21-22页 |
| 1.5 细胞因子与神经毒理学 | 第22-23页 |
| 1.6 热休克蛋白与神经毒理学 | 第23-24页 |
| 1.7 试验的目的与意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-41页 |
| 2.1 主要的仪器、试剂及配制 | 第26-29页 |
| 2.1.1 主要的仪器 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.3 试剂盒 | 第27页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第27-29页 |
| 2.2 美国王鸽AVM亚慢性中毒模型的复制与样品采集 | 第29页 |
| 2.3 鸽胚脑神经细胞的培养条件优化、鉴定及处理 | 第29-31页 |
| 2.3.1 鸽胚脑神经细胞培养条件的优化 | 第29-30页 |
| 2.3.2 鸽胚脑神经细胞鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 鸽胚脑神经细胞的染毒处理 | 第31页 |
| 2.4. α-Syn基因RNA干扰条件的建立 | 第31-33页 |
| 2.4.1 Stealth RNA的设计与制备 | 第31-32页 |
| 2.4.2 Stealth RNA转染条件的优化 | 第32页 |
| 2.4.3 Stealth RNA干扰引物的筛选 | 第32-33页 |
| 2.5 AVM对鸽胚脑神经细胞半数致死效应的检测 | 第33页 |
| 2.6 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞凋亡相关指标检测 | 第33-39页 |
| 2.6.1 TUNNEL法检测细胞凋亡率 | 第33-34页 |
| 2.6.2 HOECHST染色法检测细胞凋亡率 | 第34页 |
| 2.6.3 凋亡相关基因的mRNA表达检测 | 第34-37页 |
| 2.6.4 凋亡相关基因的蛋白表达检测 | 第37-39页 |
| 2.7 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因及UPP通路水解酶活性检测 | 第39页 |
| 2.7.1 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达检测 | 第39页 |
| 2.7.2 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞UPP通路水解酶活性检测 | 第39页 |
| 2.8 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达检测 | 第39页 |
| 2.9 鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达检测 | 第39-40页 |
| 2.10 试验数据的统计分析 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-67页 |
| 3.1 优化培养后不同时期鸽胚脑神经细胞形态学观察结果 | 第41页 |
| 3.2 优化培养的鸽胚脑神经细胞免疫学鉴定结果 | 第41-42页 |
| 3.3 α-Syn基因RNA干扰条件的建立 | 第42-43页 |
| 3.3.1 Stealth RNA转染条件的优化 | 第42页 |
| 3.3.2 α-Syn Stealth RNA干扰引物的筛选 | 第42-43页 |
| 3.4 AVM对鸽胚脑神经细胞半数致死效应检测结果 | 第43-44页 |
| 3.5 敲低α-Syn基因对AVM致鸽脑神经细胞凋亡的影响 | 第44-52页 |
| 3.5.1 AVM诱导鸽胚脑神经细胞凋亡的TUNNEL检测结果 | 第44-46页 |
| 3.5.2 敲低α-Syn基因前后AVM诱导鸽胚脑神经细胞凋亡的HOECHST检测结果 | 第46-47页 |
| 3.5.3 敲低α-Syn基因前后凋亡相关基因的表达变化 | 第47-52页 |
| 3.6 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响 | 第52-56页 |
| 3.6.1 AVM染毒对鸽脑组织α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响 | 第52-54页 |
| 3.6.2 AVM染毒对鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达及UPP通路水解酶活性影响 | 第54-56页 |
| 3.7 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响 | 第56-63页 |
| 3.7.1 AVM染毒对鸽脑组织细胞因子相关基因mRNA表达的影响 | 第56-62页 |
| 3.7.2 敲低α-Syn基因前后AVM染毒对鸽胚脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响 | 第62-63页 |
| 3.8 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达的影响 | 第63-67页 |
| 3.8.1 AVM染毒对鸽脑组织热休克蛋白相关基因表达的影响 | 第63-65页 |
| 3.8.2 敲低α-Syn基因前后AVM染毒对鸽胚脑神经细胞热休克蛋白相关基因表达的影响 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-78页 |
| 4.1 神经细胞的优化培养及鉴定 | 第67-68页 |
| 4.2 α-Syn基因干扰条件的建立 | 第68-69页 |
| 4.3 敲低α-Syn基因对AVM致鸽脑神经细胞凋亡的影响 | 第69-73页 |
| 4.3.1 AVM染毒对鸽胚脑神经细胞凋亡率的影响 | 第70-71页 |
| 4.3.2 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞凋亡相关基因表达的影响 | 第71-72页 |
| 4.3.3 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞α-Syn基因表达的影响 | 第72-73页 |
| 4.3.4 敲低α-Syn基因对AVM致鸽胚脑神经细胞凋亡的影响 | 第73页 |
| 4.4 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞细胞因子相关基因mRNA表达的影响 | 第73-75页 |
| 4.5 AVM染毒对鸽脑组织和鸽胚脑神经细胞UPP通路水解酶活性影响 | 第75-76页 |
| 4.6 敲低α-Syn基因对AVM染毒条件下鸽脑神经细胞热休克蛋白相关基因mRNA表达的影响 | 第76-78页 |
| 5 结论 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-90页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第90页 |
