| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 丹参的研究概况 | 第12-16页 |
| 1.1.1 丹参的植物学特性 | 第12页 |
| 1.1.2 丹参的主要化学成分及药理活性 | 第12-14页 |
| 1.1.3 丹参资源利用现状 | 第14-15页 |
| 1.1.4 丹参分子生物学研究现状 | 第15-16页 |
| 1.2 丹参酚酸类活性成分生物合成调控研究现状 | 第16-20页 |
| 1.2.1 丹参酚酸类成分生物合成途径的研究概况 | 第16-18页 |
| 1.2.2 丹参酚酸类物质合成途径的调控研究 | 第18-20页 |
| 1.3 植物人工miRNA(artificial microRNA,amiRNA)干扰技术 | 第20-24页 |
| 1.3.1 AmiRNA的特点 | 第20-21页 |
| 1.3.2 AmiRNA的设计方法及原理 | 第21-23页 |
| 1.3.3 AmiRNA干扰技术在植物中的应用 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第24-26页 |
| 第2章 AmiRNA表达载体的构建 | 第26-34页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第26页 |
| 2.1.2 试剂药品及配制方法 | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-31页 |
| 2.2.1 AmiRNA的分子设计及克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.2 引入酶切位点 | 第30-31页 |
| 2.2.3 植物表达载体的构建 | 第31页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第3章 丹参amiRNA-SmPAP1株系的获得及检测 | 第34-48页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第34-36页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第34页 |
| 3.1.2 菌株及载体 | 第34页 |
| 3.1.3 试剂药品及配制方法 | 第34-36页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2 试验方法 | 第36-43页 |
| 3.2.1 重组质粒导入农杆菌EHA105 | 第36-37页 |
| 3.2.2 PCR鉴定根癌农杆菌EHA105转化子 | 第37页 |
| 3.2.3 根癌农杆菌EHA105介导的丹参叶盘转化法 | 第37-38页 |
| 3.2.4 转基因丹参株系DNA水平的检测 | 第38-40页 |
| 3.2.5 转基因丹参株系转录水平的检测 | 第40-43页 |
| 3.3 实验结果 | 第43-46页 |
| 3.3.1 转基因丹参株系DNA水平的检测 | 第43页 |
| 3.3.2 丹参SmPAP1基因的表达特征分析 | 第43-44页 |
| 3.3.3 转基因株系半定量RT-PCR检测 | 第44-45页 |
| 3.3.4 转基因株系实时荧光定量PCR检测 | 第45-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第4章 转基因丹参总酚酸、总黄酮及花青素含量的测定 | 第48-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第48页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 4.1.2 试剂及药品 | 第48页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第48页 |
| 4.2 试验方法 | 第48-50页 |
| 4.2.1 实验材料准备 | 第48-49页 |
| 4.2.2 转基因丹参株系总酚酸含量的测定 | 第49页 |
| 4.2.3 转基因丹参株系总黄酮含量的测定 | 第49-50页 |
| 4.2.4 转基因丹参株系花青素含量的测定 | 第50页 |
| 4.3 实验结果 | 第50-52页 |
| 4.3.1 总酚酸含量分析 | 第50-51页 |
| 4.3.2 总黄酮含量分析 | 第51页 |
| 4.3.3 花青素含量分析 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第5章 转基因株系酚酸类次生代谢产物含量检测 | 第54-62页 |
| 5.1 实验材料 | 第54页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第54页 |
| 5.1.2 试剂及药品 | 第54页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第54页 |
| 5.2 试验方法 | 第54-57页 |
| 5.2.1 对照品溶液的制备 | 第54-55页 |
| 5.2.2 供试品溶液的制备 | 第55页 |
| 5.2.3 HPLC条件 | 第55页 |
| 5.2.4 线性关系和检测范围 | 第55页 |
| 5.2.5 RNA提取及基因表达分析 | 第55-57页 |
| 5.3 实验结果 | 第57-60页 |
| 5.3.1 转基因丹参株系酚酸类活性成分含量的HPLC测定 | 第57-58页 |
| 5.3.2 酚酸代谢途径中酶基因的表达变化 | 第58-60页 |
| 5.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第6章 转基因株系表型观察 | 第62-64页 |
| 6.1 实验材料 | 第62页 |
| 6.2 实验结果 | 第62-63页 |
| 6.3 讨论 | 第63-64页 |
| 第7章 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 攻读硕士学位期间研究成果 | 第76页 |
