| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 符号说明 | 第11-12页 |
| 文献综述 细菌Ⅰ型菌毛结构及其致病性研究进展 | 第12-23页 |
| 1.1 形态结构与基因组成 | 第12-14页 |
| 1.2 菌毛表达 | 第14-15页 |
| 1.3 生物学相关特性 | 第15-16页 |
| 1.4 致病性 | 第16-18页 |
| 1.4.1 黏附能力 | 第16页 |
| 1.4.2 侵袭能力 | 第16-17页 |
| 1.4.3 生物被膜形成能力 | 第17页 |
| 1.4.4 免疫反应 | 第17-18页 |
| 1.4.5 与其它黏附因子间互作 | 第18页 |
| 1.5 总结与展望 | 第18-19页 |
| 参考文献 | 第19-23页 |
| 试验研究 | 第23-61页 |
| 研究一、F18ab大肠杆菌Ⅰ型菌毛主要亚单位基因fimA缺失株的构建 | 第23-34页 |
| 摘要 | 第23页 |
| Abastract | 第23-24页 |
| 1. 材料 | 第24-25页 |
| 1.1 菌株、质粒 | 第24-25页 |
| 1.2 培养基和主要试剂 | 第25页 |
| 1.3 主要仪器 | 第25页 |
| 2. 方法 | 第25-29页 |
| 2.1 fimA基因缺失引物设计 | 第25-26页 |
| 2.2 融合PCR产物的制备和纯化 | 第26-27页 |
| 2.3 感受态细胞的制备及转化 | 第27页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.3.2 质粒pKD46的转化 | 第27页 |
| 2.3.3 Red重组酶的诱导和感受态细胞的制备 | 第27页 |
| 2.4 同源臂Cat基因PCR产物电转化 | 第27-28页 |
| 2.5 一次同源重组菌△fimA::Cat的PCR鉴定 | 第28页 |
| 2.6 质粒pKD46的消除 | 第28页 |
| 2.7 FLP位点专一性重组 | 第28-29页 |
| 2.8 第二次重组菌的鉴定 | 第29页 |
| 3. 结果 | 第29-31页 |
| 3.1 融合PCR产物的制备 | 第29页 |
| 3.2 第一次同源重组菌△fimA::Cat的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3 第二次重组菌△fimA的鉴定 | 第30-31页 |
| 4. 讨论 | 第31-32页 |
| 参考文献 | 第32-34页 |
| 研究二、F18ab~+大肠杆菌Ⅰ型菌毛主要亚单位FimA介导的相关病原性分析 | 第34-61页 |
| 摘要 | 第34页 |
| Abstract | 第34-35页 |
| 1 材料 | 第35-36页 |
| 1.1 菌株、质粒、细胞系 | 第35-36页 |
| 1.2 主要试剂及配制 | 第36页 |
| 1.3 仪器设备 | 第36页 |
| 1.4 试验动物 | 第36页 |
| 2. 方法 | 第36-42页 |
| 2.1 回补株的构建 | 第36页 |
| 2.2 血凝试验(HA)和甘露糖敏感性血凝试验(MSHA) | 第36-37页 |
| 2.3 酵母凝集试验和凝集抑制试验 | 第37页 |
| 2.4 生长试验 | 第37页 |
| 2.5 生物被膜形成试验 | 第37-38页 |
| 2.5.1 生物被膜的定性试验 | 第37页 |
| 2.5.2 生物被膜的定量试验 | 第37-38页 |
| 2.6 IPEC-J2细胞黏附和侵袭试验 | 第38-39页 |
| 2.6.1 IPEC-J2细胞的培养和传代 | 第38页 |
| 2.6.2 IPEC-J2细胞黏附试验和黏附抑制试验 | 第38页 |
| 2.6.3 IPEC-J2细胞侵袭试验和侵袭抑制试验 | 第38-39页 |
| 2.7 Real Time PCR定量分析试验 | 第39-41页 |
| 2.7.1 总RNA的提取 | 第39页 |
| 2.7.2 除去基因组DNA | 第39页 |
| 2.7.3 反转录反应 | 第39-40页 |
| 2.7.4 Real Time PCR反应 | 第40-41页 |
| 2.8. 小鼠肠道定植试验 | 第41-42页 |
| 3. 结果 | 第42-53页 |
| 3.1 回补株的构建 | 第42-43页 |
| 3.2 血凝试验(HA)和甘露糖敏感性血凝试验(MSHA) | 第43页 |
| 3.3 酵母凝集试验和凝集抑制试验 | 第43页 |
| 3.4 生长试验 | 第43-44页 |
| 3.5 生物被膜定性定量试验 | 第44-45页 |
| 3.5.1 生物被膜定性试验 | 第44-45页 |
| 3.5.2 生物被膜定量试验 | 第45页 |
| 3.6 IPEC-J2细胞黏附试验和黏附抑制试验 | 第45-47页 |
| 3.7 IPEC-J2细胞侵袭试验和侵袭抑制试验 | 第47-48页 |
| 3.8 荧光定量PCR试验 | 第48-50页 |
| 3.8.1 fimA基因的缺失对其上下游基因的影响 | 第48-49页 |
| 3.8.2 fimA基因的缺失对其它毒力因子的影响 | 第49-50页 |
| 3.9 小鼠肠道定植试验 | 第50-53页 |
| 3.9.1 细菌的培养与计数 | 第50-51页 |
| 3.9.2 临床变化与解剖 | 第51页 |
| 3.9.3 试验解剖 | 第51-53页 |
| 3.9.3.1 未病死小鼠的剖检 | 第51-52页 |
| 3.9.3.2 病死小鼠的剖检 | 第52-53页 |
| 3.9.3.3 全程给予链霉素饮水小鼠的剖检 | 第53页 |
| 4. 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 IPEC-J2细胞黏附和侵袭试验 | 第54-55页 |
| 4.2 生物被膜形成试验 | 第55页 |
| 4.3 Real Time PCR反应试验 | 第55-56页 |
| 4.4 小鼠肠道定植试验 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-61页 |
| 全文小结 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
