| 符号说明 | 第5-10页 |
| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-29页 |
| 1.1 禽流感概况 | 第14-16页 |
| 1.1.1 AIV病原分子结构 | 第14-15页 |
| 1.1.2 H9N2亚型发生情况 | 第15页 |
| 1.1.3 H9N2亚型AIV流行病学 | 第15-16页 |
| 1.2 .核酸疫苗研究进展 | 第16-25页 |
| 1.2.1 抗AIV核酸疫苗研究现状 | 第16-17页 |
| 1.2.2 核酸疫苗作用机理 | 第17-21页 |
| 1.2.3 核酸疫苗优缺点 | 第21-22页 |
| 1.2.4 提高DNA疫苗免疫效果的策略 | 第22-25页 |
| 1.3 补体系统研究进展 | 第25-27页 |
| 1.3.1 补体C3d分子结构 | 第25-27页 |
| 1.3.2 补体分子C3d可能作用机理 | 第27页 |
| 1.4 本研究的目的及意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 病毒、细胞和实验动物 | 第29页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第29页 |
| 2.1.4 试验所用溶液及配制 | 第29-30页 |
| 2.1.5 引物的设计 | 第30-31页 |
| 2.2 pVAX1-HA及pVAX1-HA-P29.n(1、2、4)串联质粒构建 | 第31-35页 |
| 2.2.1 构建pVAX1-P29.n(1、2、4)质粒 | 第31-32页 |
| 2.2.2 构建blunt-HA质粒 | 第32-34页 |
| 2.2.2.1 H9N2亚型禽流感病毒RNA提取 | 第32页 |
| 2.2.2.2 RT-PCR | 第32-33页 |
| 2.2.2.3 HA扩增片段回收纯化 | 第33页 |
| 2.2.2.4 HA片段连接pEASY-blunt载体 | 第33页 |
| 2.2.2.5 SDT1株HA特性分析 | 第33-34页 |
| 2.2.3 构建pVAX1-HA-P29.n(1、2、4)质粒 | 第34-35页 |
| 2.2.3.1 HA片段连接pVAX1、pVAX1-P29.n(1、2、4) | 第34页 |
| 2.2.3.2 转化Trans1-T1感受态细胞 | 第34-35页 |
| 2.3 重组质粒的体外转染 | 第35页 |
| 2.4 动物免疫试验 | 第35-38页 |
| 2.4.1 质粒大提以及纯度检测 | 第35-36页 |
| 2.4.2 动物分组及免疫 | 第36页 |
| 2.4.3 IFN-γ、IL-4及抗HA抗体水平检测 | 第36-37页 |
| 2.4.4 重组质粒淋巴细胞增殖试验 | 第37-38页 |
| 2.5 攻毒保护实验 | 第38-41页 |
| 2.5.1 血凝抑制试验检测HI抗体 | 第38-39页 |
| 2.5.2 病理组织学变化检测 | 第39页 |
| 2.5.3 攻毒后qPCR检测排毒规律 | 第39-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-52页 |
| 3.1 HA及C3d-P29基因的克隆 | 第41-42页 |
| 3.2 重组构建质粒的酶切鉴定 | 第42页 |
| 3.3 IFA检测重组质粒的表达 | 第42-43页 |
| 3.4 血清中IL-4、IFN-γ及抗HA抗体水平 | 第43-45页 |
| 3.5 免疫SPF鸡脾淋巴细胞增殖试验 | 第45-46页 |
| 3.6 核酸疫苗攻毒保护效果评价 | 第46-52页 |
| 3.6.1 H9N2(SDT1株)HA生物学特性 | 第46-48页 |
| 3.6.2 攻毒后血清血凝抑制试验结果 | 第48页 |
| 3.6.3 病理组织切片观察 | 第48-49页 |
| 3.6.4 SPF鸡感染H9N2亚型AIV后的排毒规律 | 第49-52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 4.1 C3d-P29佐剂融合AIV-HA基因免疫增强效果研究的意义 | 第52-53页 |
| 4.2 融合C3d-P29.n(1、2、4)HA核酸疫苗免疫保护性研究 | 第53页 |
| 4.3 抵抗同源H9N2毒株的攻毒保护性研究 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第67页 |
