| 摘要 | 第4-6页 |
| SUMMARY | 第6-7页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 主要仪器设备 | 第9-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 奶牛乳腺炎研究现状 | 第13-15页 |
| 1.1 奶牛乳腺炎 | 第13-15页 |
| 1.1.1 奶牛乳腺炎的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.2 奶牛乳腺炎的病因 | 第14-15页 |
| 1.1.3 奶牛乳腺的防御机制 | 第15页 |
| 2 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌 | 第15-18页 |
| 2.1 金黄色葡萄球菌的生物学特性 | 第15-16页 |
| 2.1.1 金黄色葡萄球菌毒力因子及危害 | 第15-16页 |
| 2.1.2 金黄色葡萄球菌耐药性 | 第16页 |
| 2.2 大肠杆菌的生物学特性 | 第16-18页 |
| 2.2.1 大肠杆菌危害及毒力因子 | 第16-17页 |
| 2.2.2 大肠杆菌耐药性 | 第17-18页 |
| 3 细胞因子 | 第18-19页 |
| 3.1 细胞因子概述 | 第18-19页 |
| 3.1.1 白细胞介素-1β | 第18-19页 |
| 3.1.2 白细胞介素-1受体Ⅰ | 第19页 |
| 3.1.3 肿瘤坏死因子 | 第19页 |
| 4 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二部分 实验研究 | 第21-46页 |
| 实验一 奶牛乳腺上皮细胞体外培养及鉴定 | 第21-28页 |
| 前言 | 第21-22页 |
| 1 研究材料与方法 | 第22-24页 |
| 1.1 主要仪器及设备 | 第22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.3 奶牛乳腺组织的样品采集 | 第22页 |
| 1.4 奶牛乳腺上皮细胞的体外分离及培养 | 第22-23页 |
| 1.5 奶牛乳腺上皮细胞的纯化及传代 | 第23页 |
| 1.6 奶牛乳腺上皮细胞的冻存和复苏 | 第23-24页 |
| 1.7 BMECs的免疫细胞化学鉴定 | 第24页 |
| 2 结果与分析 | 第24-26页 |
| 2.1 奶牛乳腺上皮细胞体外培养的形态学观察 | 第24-25页 |
| 2.2 奶牛乳腺上皮细胞的免疫细胞化学鉴定 | 第25页 |
| 2.3 奶牛乳腺上皮细胞的冻存 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 4 小结 | 第27-28页 |
| 实验二 不同浓度S.aureus、E.coli对BMECs主要炎性因子表达和细胞凋亡的影响 | 第28-40页 |
| 前言 | 第28-29页 |
| 1 研究材料与方法 | 第29-31页 |
| 1.1 奶牛乳腺组织的样品采集和处理 | 第29页 |
| 1.2 菌种来源及培养 | 第29页 |
| 1.3 主要仪器设备与试剂 | 第29页 |
| 1.4 引物的设计 | 第29-30页 |
| 1.5 不同浓度S.aureus、E.coli分别感染BMECs | 第30页 |
| 1.6 总RNA提取、反转录 | 第30-31页 |
| 1.7 qRT-PCR检测IL-1β、IL1RⅠ和TNF-αmRNA表达情况 | 第31页 |
| 1.8 一步法TUNEL凋亡检测 | 第31页 |
| 2 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.1 引物特异性的确定 | 第31-33页 |
| 2.2 不同浓度S.aureus感染BMECs对IL-1β、IL1RⅠ和TNF-αmRNA表达的影响 | 第33-34页 |
| 2.3 不同浓度E.coli感染BMECs对IL-1β、IL1RⅠ和TNF-αmRNA表达的影响 | 第34-35页 |
| 2.4 不同浓度S.aureus、E.coli感染BMECs对细胞凋亡的影响 | 第35-37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 4 小结 | 第39-40页 |
| 实验三 最佳浓度S.aureus、E.coli感染BMECs对两种细胞因子和受体mRNA表达的影响 | 第40-46页 |
| 前言 | 第40-41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-42页 |
| 1.1 样品采集和处理 | 第41页 |
| 1.2 主要仪器设备和试剂 | 第41页 |
| 1.3 引物设计 | 第41页 |
| 1.4 最佳浓度S.aureus、E.coli分别感染BMECs | 第41页 |
| 1.5 qRT-PCR检测IL1-β、IL1RⅠ和TNF-α基因的表达 | 第41-42页 |
| 2 结果 | 第42-45页 |
| 2.1 奶牛乳腺上皮细胞IL1RⅠ、IL-1β和TNF-α基因表达检测 | 第42-43页 |
| 2.2 最佳S.aureus浓度感染奶牛乳腺上皮细胞对IL1RⅠ、IL-1β和TNF-α基因表达的情况 | 第43-44页 |
| 2.3 最佳浓度E.coli感染奶牛乳腺上皮细胞对IL1RⅠ、IL-1β和TNF-α基因表达的情况 | 第44-45页 |
| 3 讨论 | 第45页 |
| 4 小结 | 第45-46页 |
| 全文总结 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 导师简介 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55-56页 |
