| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-22页 |
| ·转基因作物研究概况 | 第8-10页 |
| ·转基因食品的概念 | 第8页 |
| ·转基因食品的历史与现状 | 第8-9页 |
| ·转基因食品的安全性 | 第9-10页 |
| ·抗除草剂植物的研究 | 第10-16页 |
| ·草甘磷除草剂与抗草甘磷大豆 | 第10-12页 |
| ·抗草甘磷转基因大豆中的不明基因片段 | 第12页 |
| ·抗草甘磷转基因造成草甘磷残留及用量增加 | 第12-13页 |
| ·抗草甘磷转基因大豆减产现象 | 第13页 |
| ·杂草对草甘磷产生抗性 | 第13-15页 |
| ·抗草甘磷转基因大豆的外源性基因逃逸 | 第15-16页 |
| ·抗草甘磷转基因大豆的潜在生态风险 | 第16页 |
| ·转基因检测技术的研究 | 第16-21页 |
| ·基于核酸的PCR检测方法 | 第17-18页 |
| ·基于蛋白质的免疫学检测方法 | 第18-19页 |
| ·转基因食品检测技术的发展方向 | 第19-21页 |
| ·本课题研究的目的、意义和内容 | 第21-22页 |
| ·本课题研究目的及意义 | 第21页 |
| ·本课题的研究内容 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-42页 |
| ·实验材料 | 第22-27页 |
| ·实验试剂及样品 | 第22-23页 |
| ·仪器及材料 | 第23-24页 |
| ·常用溶液的配制 | 第24-27页 |
| ·实验方法 | 第27-42页 |
| ·转基因大豆DNA提取 | 第27-28页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·目的基因的验证 | 第29-32页 |
| ·重组表达载体EPSPS-pET-30a(+)的构建 | 第32-34页 |
| ·EPSPS-pET-30a(+)重组质粒在大肠杆菌BL21中的表达 | 第34-36页 |
| ·包涵体复性及蛋白纯化 | 第36-37页 |
| ·EPSPS多克隆抗体的制备 | 第37-38页 |
| ·Western-blot分析 | 第38-39页 |
| ·双抗夹心ELISA方法的初步建立 | 第39-42页 |
| 3 结果与讨论 | 第42-57页 |
| ·DNA提取 | 第42-43页 |
| ·CTAB法提取DNA | 第42-43页 |
| ·总DNA定量 | 第43页 |
| ·PCR扩增EPSPS基因 | 第43-44页 |
| ·胶回收产物鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒测序分析 | 第44-46页 |
| ·表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·载体的选用 | 第46页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·菌落PCR筛选 | 第47页 |
| ·表达载体的酶切验证 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第48-50页 |
| ·重组蛋白试表达 | 第48-49页 |
| ·IPTG浓度优化 | 第49页 |
| ·诱导时间优化 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第50-51页 |
| ·包涵体复性 | 第50页 |
| ·EPSPS重组蛋白亲和层析纯化 | 第50-51页 |
| ·EPSPS重组表达蛋白的浓度 | 第51页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第51-52页 |
| ·抗血清效价 | 第51-52页 |
| ·抗体纯化 | 第52页 |
| ·Western-blot方法检测多克隆抗体 | 第52-53页 |
| ·双抗夹心ELISA方法的建立 | 第53-57页 |
| ·条件优化 | 第53-56页 |
| ·双抗体夹心ELISA法标准曲线的绘制 | 第56-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-67页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第67-68页 |
| 8 致谢 | 第68页 |