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新型混合模式色谱强化抗体纯化的研究

中文摘要第3-4页
ABSTRACT第4页
第一章 文献综述第8-17页
    1.1 引言第8页
    1.2 抗体的结构、来源及重要性第8-12页
        1.2.1 抗体的基本结构第8-10页
        1.2.2 抗体的来源第10-11页
            1.2.2.1 多克隆抗体第10页
            1.2.2.2 单克隆抗体第10-11页
            1.2.2.3 基因工程抗体第11页
        1.2.3 抗体的重要价值第11-12页
    1.3 抗体纯化常用的液相色谱技术第12-14页
        1.3.1 沉淀技术第12-13页
        1.3.2 凝胶过滤色谱第13页
        1.3.3 离子交换色谱第13页
        1.3.4 疏水性相互作用色谱第13页
        1.3.5 亲和色谱第13-14页
    1.4 混合模式色谱第14-16页
        1.4.1 简介第14-15页
        1.4.2 混合模式色谱的优点第15页
        1.4.3 混合模式色谱纯化抗体第15-16页
    1.5 本文的主要工作第16-17页
第二章 混合模式色谱介质的合成及吸附性能研究第17-32页
    2.1 引言第17页
    2.2 材料与方法第17-24页
        2.2.1 实验材料与设备第17-19页
        2.2.2 蛋白质溶液标准曲线第19页
        2.2.3 介质的活化第19-21页
            2.2.3.1 活化过程第20页
            2.2.3.2 测定活化率第20-21页
        2.2.4 配基的偶联第21-22页
            2.2.4.1 偶联方法第21页
            2.2.4.2 测定配基修饰密度第21-22页
        2.2.5 蛋白质吸附平衡实验第22-23页
            2.2.5.1 缓冲液的配制第22页
            2.2.5.2 静态吸附容量测定第22-23页
        2.2.6 动态吸附性能第23-24页
        2.2.7 AN Sepharose Fast Flow 色谱柱的重复使用性能测试第24页
    2.3 结果与讨论第24-31页
        2.3.1 介质的合成第24页
            2.3.1.1 活化率测定第24页
            2.3.1.2 配基修饰密度的测定第24页
        2.3.2 蛋白质静态吸附平衡实验第24-29页
            2.3.2.1 不同配基修饰密度下γ球蛋白吸附平衡实验第24-25页
            2.3.2.2 不同配基修饰密度下 BSA 吸附平衡实验第25-27页
            2.3.2.3 高浓度 NaCl下γ球蛋白吸附平衡实验第27-28页
            2.3.2.4 高浓度 NaCl下 BSA 吸附平衡实验第28-29页
        2.3.3 动态吸附性能第29-30页
        2.3.4 AN Sepharose Fast Flow 的重复使用性能第30-31页
    2.4 本章小结第31-32页
第三章 混合模式作用色谱介质纯化抗体第32-48页
    3.1 引言第32页
    3.2 材料与方法第32-38页
        3.2.1 实验材料与设备第32-34页
        3.2.2 抗血清原料液的预处理第34页
        3.2.3 洗脱条件确定第34页
        3.2.4 上样条件优化第34-36页
            3.2.4.1 盐析处理方案第35页
            3.2.4.2 色谱纯化操作第35-36页
        3.2.5 从抗血清中纯化抗体第36-37页
        3.2.6 过量血清上样的抗体纯化第37页
        3.2.7 分析方法第37-38页
            3.2.7.1 Bradford 法测蛋白含量第37页
            3.2.7.2 SDS-PAGE 凝胶电泳第37-38页
    3.3 结果与讨论第38-46页
        3.3.1 上样条件优化实验第38-40页
            3.3.1.1 盐析处理的纯化结果第38-40页
            3.3.1.2 直接高盐上样和高盐清洗的纯化结果第40页
        3.3.2 不同配基密度下抗血清的纯化结果第40-46页
            3.3.2.1 不同配基密度 AN Sepharose Fast Flow 介质对 RATS 的纯化结果第40-43页
            3.3.2.2 不同配基密度 AN Sepharose Fast Flow 介质对 ASRS 的纯化结果第43-45页
            3.3.2.3 MEP 和 MSSR 对 RATS 和 ASRS 的纯化结果第45-46页
        3.3.3 过量血清上样的抗体纯化结果第46页
    3.4 本章小结第46-48页
第四章 多柱连续吸附实验纯化抗体第48-51页
    4.1 引言第48页
    4.2 材料与方法第48-49页
        4.2.1 实验材料与设备第48页
        4.2.2 RATS 抗血清原料的预处理第48页
        4.2.3 AN30 SepFF 的三柱串联连续吸附纯化实验第48-49页
        4.2.4 MEP 的三柱串联连续吸附纯化实验第49页
        4.2.5 分析方法第49页
    4.3 结果与讨论第49-50页
        4.3.1 AN30 SepFF 的三柱串联连续吸附纯化结果第49-50页
        4.3.2 MEP 的三柱串联连续吸附纯化结果第50页
    4.4 本章小结第50-51页
第五章 结论与展望第51-53页
    5.1 全文总结第51-52页
    5.2 应用展望第52-53页
参考文献第53-57页
附录第57-60页
参研项目和学术成果第60-61页
致谢第61页

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