| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-28页 |
| 1.1 引言 | 第10-18页 |
| 1.1.1 结构和催化机制 | 第11-12页 |
| 1.1.2 基因工程研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.3 应用 | 第16-18页 |
| 1.2 酒石酸研究概况 | 第18-20页 |
| 1.2.1 L(+)-酒石酸研究概况 | 第18-19页 |
| 1.2.2 D(-)-酒石酸研究概况 | 第19-20页 |
| 1.3 高密度发酵综述 | 第20-27页 |
| 1.3.1 高密度发酵的影响因素 | 第21-23页 |
| 1.3.2 补料策略 | 第23页 |
| 1.3.3 减少乙酸积累的措施 | 第23-27页 |
| 1.4 研究内容及研究目的 | 第27-28页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第27页 |
| 1.4.2 研究目的 | 第27-28页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第28-38页 |
| 2.1 菌种和质粒 | 第28-29页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第29-30页 |
| 2.2.2 工具酶及主要试剂 | 第30页 |
| 2.3 培养基与培养条件 | 第30-31页 |
| 2.4 实验分析及检测方法 | 第31-38页 |
| 2.4.1 分子克隆相关实验 | 第31页 |
| 2.4.2 pH测定 | 第31页 |
| 2.4.3 细胞密度测定 | 第31页 |
| 2.4.4 甘油浓度的测定 | 第31-33页 |
| 2.4.5 蛋白浓度的测定 | 第33-34页 |
| 2.4.6 大肠杆菌细胞超声波破碎以及胞内可溶性蛋白的提取 | 第34页 |
| 2.4.7 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第34页 |
| 2.4.8 酶活力的测定 | 第34页 |
| 2.4.9 酒石酸的测定 | 第34-35页 |
| 2.4.10 乙酸的测定 | 第35-36页 |
| 2.4.11 D-(-)-酒石酸的提取 | 第36-38页 |
| 第三章 产D(-)-酒石酸环氧化物水解酶重组菌的构建、优化表达与产物纯化 | 第38-50页 |
| 3.1 引言 | 第38页 |
| 3.2 材料与方法 | 第38-40页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第38页 |
| 3.2.2 基本培养条件 | 第38-39页 |
| 3.2.3 工具酶及主要试剂 | 第39页 |
| 3.2.4 质粒DNA的提取 | 第39页 |
| 3.2.5 DNA检测及切胶回收 | 第39页 |
| 3.2.6 构建重组质粒 | 第39页 |
| 3.2.7 重组菌的构建 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-48页 |
| 3.3.1 全合成产D(-)-酒石酸环氧化物水解酶基因 | 第40页 |
| 3.3.2 重组质粒的构建 | 第40-42页 |
| 3.3.3 定向连接及双酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3.4 重组菌的构建及SDS-PAGE检测环氧化物水解酶表达 | 第43-45页 |
| 3.3.5 诱导表达条件优化 | 第45-48页 |
| 3.3.6 D(-)-酒石酸的提取及纯度检测 | 第48页 |
| 3.4 小结 | 第48-50页 |
| 第四章 工程菌以甘油为碳源产环氧化物水解酶的放大培养 | 第50-62页 |
| 4.1 引言 | 第50页 |
| 4.2 材料与方法 | 第50-52页 |
| 4.2.1 菌株 | 第50页 |
| 4.2.2 培养基 | 第50-51页 |
| 4.2.3 培养方法 | 第51-52页 |
| 4.2.4 主要培养设备 | 第52页 |
| 4.2.5 分析检测方法 | 第52页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第52-60页 |
| 4.3.1 不同甘油浓度对重组大肠杆菌E. coli Rosetta(DE3)/pET28(a)-CESH生长的影响 | 第52-54页 |
| 4.3.2 批次发酵 | 第54-55页 |
| 4.3.3 分批补料发酵 | 第55-57页 |
| 4.3.4 变匀速流加补料发酵 | 第57-60页 |
| 4.4 小结 | 第60-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-66页 |
| 5.1 结论 | 第62-63页 |
| 5.2 本文创新之处 | 第63页 |
| 5.3 展望 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 硕士期间主要科研成果： | 第76页 |
