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海洋弧菌QY105中褐藻胶裂解酶的研究

摘要第5-7页
Abstract第7-8页
0 引言第14-31页
    0.1 褐藻胶第14-20页
        0.1.1 褐藻胶的来源第14页
        0.1.2 褐藻胶的结构第14-15页
        0.1.3 褐藻胶在微生物中的代谢第15-16页
        0.1.4 褐藻胶生物活性及其应用研究进展第16-20页
            0.1.4.1 褐藻胶在日用品中的应用第16页
            0.1.4.2 褐藻胶在食品工业中的应用第16-18页
            0.1.4.3 褐藻胶在医药领域中的应用第18-20页
    0.2 褐藻胶寡糖第20-23页
        0.2.1 褐藻胶寡糖制备方法第20-21页
            0.2.1.1 物理降解法第20页
            0.2.1.2 化学降解法第20页
            0.2.1.3 酶解法第20-21页
        0.2.2 褐藻胶寡糖的生物学功能第21-22页
            0.2.2.1 抗肿瘤第21页
            0.2.2.2 抗凝血第21页
            0.2.2.3 降血糖血脂第21页
            0.2.2.4 抗自由基氧化第21页
            0.2.2.5 抗炎症第21-22页
            0.2.2.6 调节免疫第22页
            0.2.2.7 促进生长作用第22页
        0.2.3 褐藻胶寡糖的应用第22-23页
            0.2.3.1 医药领域第22页
            0.2.3.2 食品领域第22-23页
            0.2.3.5 农业领域第23页
    0.3 褐藻胶裂解酶第23-29页
        0.3.1 褐藻胶裂解酶的来源第23-24页
        0.3.2 褐藻胶裂解酶的作用机制第24-25页
        0.3.3 褐藻胶裂解酶的分类第25-26页
        0.3.4 褐藻胶裂解酶的结构第26页
        0.3.5 褐藻胶裂解酶的性质第26页
        0.3.6 褐藻胶裂解酶的生物学功能第26-27页
            0.3.6.1 褐藻胶裂解酶在不产褐藻胶生物中的功能第26-27页
            0.3.6.2 褐藻胶裂解酶在产褐藻胶生物中的功能第27页
        0.3.7 褐藻胶裂解酶的应用第27-29页
            0.3.7.1 褐藻胶寡糖的制备第27页
            0.3.7.2 海藻原生质体的制备第27-28页
            0.3.7.3 肺囊性纤维化病人的治疗第28页
            0.3.7.4 降解海藻废物并再利用第28页
            0.3.7.5 生物能源第28页
            0.3.7.6 农业生产应用第28-29页
        0.3.8 褐藻胶裂解酶的应用前景展望第29页
    0.4 本论文的主要研究内容第29-31页
1 褐藻胶裂解酶菌株的筛选及鉴定第31-45页
    1.1 材料方法第31-37页
        1.1.1 实验材料第31-32页
            1.1.1.1 实验试剂第31页
            1.1.1.2 主要仪器第31页
            1.1.1.3 培养基第31-32页
        1.1.2 实验方法第32-37页
            1.1.2.1 样品采集第32页
            1.1.2.2 产酶菌株筛选第32页
            1.1.2.3 酶活测定方法及酶活定义第32页
            1.1.2.4 菌种保存第32-33页
            1.1.2.5 底物偏好性测定第33页
            1.1.2.6 细菌基因组 DNA 提取第33页
            1.1.2.7 菌株 16S rDNA 基因克隆第33-37页
            1.1.2.8 16S rDNA 序列测定及分析第37页
    1.2 实验结果第37-43页
        1.2.1 样品采集第37-38页
        1.2.2 活性菌株的筛选第38-39页
        1.2.3 菌株种属鉴定第39-43页
            1.2.3.1 菌株基因组的提取第39-40页
            1.2.3.2 菌株 16S rDNA 基因克隆第40-41页
            1.2.3.3 构建 Vibrio sp. QY105 分支系统树第41-43页
    1.3 讨论第43-44页
    1.4 小结第44-45页
2 褐藻胶裂解酶 AlyV5 的分离纯化第45-53页
    2.1 材料方法第45-48页
        2.1.1 实验材料第45-46页
            2.1.1.1 实验试剂第45页
            2.1.1.2 主要仪器第45页
            2.1.1.3 培养基第45-46页
        2.1.2 实验方法第46-48页
    2.2 实验结果第48-52页
        2.2.1 产酶曲线的测定第48-49页
        2.2.2 蛋白含量测定第49-50页
        2.2.3 硫酸铵沉淀第50页
        2.2.4 疏水层析第50页
        2.2.5 离子交换层析第50-51页
        2.2.6 SDS - PAGE第51页
        2.2.7 AlyV5 的分离纯化结果第51-52页
    2.3 讨论第52页
    2.4 小结第52-53页
3 褐藻胶裂解酶 AlyV5 酶学性质第53-63页
    3.1 材料方法第53-55页
        3.1.1 实验材料第53页
            3.1.1.1 实验试剂第53页
            3.1.1.2 主要仪器第53页
        3.1.2 实验方法第53-55页
            3.1.2.1 AlyV5 最适温度测定第53-54页
            3.1.2.2 AlyV5 温度稳定性测定第54页
            3.1.2.3 AlyV5 最适 pH 测定第54页
            3.1.2.4 AlyV5 的 pH 稳定性第54页
            3.1.2.5 NaCl 对 AlyV5 酶活影响第54页
            3.1.2.6 不同金属离子及 SDS、EDTA 对 AlyV5 酶活的影响第54页
            3.1.2.7 AlyV5 底物偏好性的测定第54-55页
            3.1.2.8 AlyV5 对底物的最终降解产物分析第55页
            3.1.2.9 AlyV5 与不同底物偏好性褐藻胶裂解酶混合使用第55页
    3.2 实验结果第55-61页
        3.2.1 AlyV5 最适反应温度第55-56页
        3.2.2 AlyV5 温度稳定性第56-57页
        3.2.3 AlyV5 最适反应 pH第57页
        3.2.4 AlyV5 的 pH 稳定性第57页
        3.2.5 NaCl 对 AlyV5 酶活的影响第57-59页
        3.2.6 不同金属离子及 SDS、EDTA 对 AlyV5 酶活的影响第59页
        3.2.7 AlyV5 底物偏好性测定第59-60页
        3.2.8 AlyV5 对底物的最终降解产物分析第60-61页
        3.2.9 AlyV5 与不同底物偏好性褐藻胶裂解酶混合使用第61页
    3.3 讨论第61-62页
    3.4 小结第62-63页
4 Vibrio sp. QY105 中褐藻胶寡糖酶基因克隆及序列分析第63-86页
    4.1 材料与方法第63-67页
        4.1.1 实验材料第63-64页
            4.1.1.1 实验试剂第63页
            4.1.1.2 主要仪器第63-64页
            4.1.1.3 培养基第64页
        4.1.2 实验方法第64-67页
            4.1.2.1 简并 PCR 筛选褐藻胶寡糖酶基因序列第64-65页
            4.1.2.2 SiteFinding-PCR 扩增已知序列的两端序列第65-67页
    4.2 实验结果第67-84页
        4.2.1 简并 PCR 引物第67-68页
        4.2.2 梯度 PCR 筛选褐藻胶寡糖酶基因结果第68-70页
            4.2.2.1 褐藻胶寡糖酶基因 A(Oal A)第68-69页
            4.2.2.3 褐藻胶寡糖酶基因 C(Oal C)第69-70页
        4.2.3 测得的序列及序列分析第70-72页
            4.2.3.1 褐藻胶寡糖酶基因 A(Oal A)部分序列第70页
            4.2.3.2 褐藻胶寡糖酶基因 B(Oal B)部分序列第70-71页
            4.2.3.3 褐藻胶寡糖酶基因 C(Oal C)部分序列第71-72页
        4.2.4 扩增已知序列两端的序列第72-84页
            4.2.4.1 引物设计第73页
            4.2.4.2 SiteFinding-PCR第73-78页
            4.2.4.3 褐藻胶寡糖酶基因序列及分析第78-84页
    4.3 讨论第84-85页
    4.4 小结第85-86页
5 总结与展望第86-88页
    5.1 总结第86-87页
    5.2 展望第87-88页
参考文献第88-93页
致谢第93-94页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第94-95页

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