| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 绪论 | 第13-24页 |
| 1.1 引言 | 第13页 |
| 1.2 苔藓植物简介 | 第13-14页 |
| 1.3 抗坏血酸过氧化物酶简介 | 第14-16页 |
| 1.3.1 抗坏血酸过氧化物酶 | 第14页 |
| 1.3.2 抗坏血酸在植物体内的功能 | 第14-15页 |
| 1.3.3 抗坏血酸过氧化物酶的定位 | 第15页 |
| 1.3.4 转 APX 基因植物 | 第15-16页 |
| 1.4 半胱氨酸过氧化物酶简介 | 第16-17页 |
| 1.4.1 过氧化物还原蛋白 | 第16页 |
| 1.4.2 Prx 在细胞中的定位 | 第16-17页 |
| 1.4.3 植物中 Prx 的功能 | 第17页 |
| 1.5 泛素类似蛋白简介 | 第17-19页 |
| 1.5.1 泛素简介 | 第17页 |
| 1.5.2 泛素-蛋白酶体的结构 | 第17-18页 |
| 1.5.3 泛素-蛋白酶体途径 | 第18-19页 |
| 1.5.4 泛素类似蛋白 | 第19页 |
| 1.6 cDNA 文库构建策略 | 第19-21页 |
| 1.6.1 cDNA 文库概念 | 第19页 |
| 1.6.2 经典 cDNA 文库 | 第19页 |
| 1.6.3 标准化 cDNA 文库 | 第19-20页 |
| 1.6.4 差减 cDNA 文库 | 第20页 |
| 1.6.5 全长 cDNA 文库 | 第20-21页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第21-22页 |
| 1.8 本研究的内容和技术路线 | 第22-24页 |
| 2 毛尖紫萼藓 GpAPX、GpPER 和 GpUBP 基因的克隆 | 第24-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 植物材料及处理 | 第24页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 溶液及缓冲液 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 总 RNA 的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 总 RNA 的纯化 | 第26页 |
| 2.2.3 反转录合成 cDNA 第一链 | 第26页 |
| 2.2.4 GpAPX、GpPER、GpUBP 基因的克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.5 PCR 产物的胶回收 | 第27-28页 |
| 2.2.6 PCR 产物与克隆载体的连接 | 第28页 |
| 2.2.7 连接产物转化大肠杆菌 | 第28-29页 |
| 2.2.8 转化结果的鉴定及菌液测序 | 第29-30页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-38页 |
| 2.3.1 总 RNA 质量的检测 | 第30-31页 |
| 2.3.2 反转录 cDNA 结果 | 第31页 |
| 2.3.3 目的基因的克隆 | 第31-34页 |
| 2.3.4 目的基因与载体 pMD 18-T 的连接 | 第34-35页 |
| 2.3.5 GpUBP 生物信息学分析 | 第35-38页 |
| 2.4 讨论 | 第38-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 3 GpUBP 基因的表达分析 | 第40-46页 |
| 3.1 实验材料 | 第40页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第40页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-42页 |
| 3.2.1 内参基因的选择及引物设计 | 第40页 |
| 3.2.2 总 RNA 的提取 | 第40-41页 |
| 3.2.3 总 RNA 的纯化 | 第41页 |
| 3.2.4 总 RNA 反转录为 cDNA | 第41页 |
| 3.2.5 GpUBP 基因的荧光定量 PCR 反应体系及程序 | 第41页 |
| 3.2.6 荧光定量 PCR 结果分析 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 3.3.1 荧光定量 PCR 引物的设计 | 第42页 |
| 3.3.2 GpUBP 基因的表达分析 | 第42-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-45页 |
| 3.5 小结 | 第45-46页 |
| 4 GpAPX、GpPER 和 GpUBP 基因表达载体构建及转化烟草 | 第46-55页 |
| 4.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 4.1.2 菌株与质粒 | 第46页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 植物表达载体构建 | 第47-48页 |
| 4.2.2 植物表达载体转化根癌农杆菌 EHA105 | 第48页 |
| 4.2.3 农杆菌叶盘法侵染烟草 | 第48-49页 |
| 4.3 结果与分析 | 第49-53页 |
| 4.3.1 GpAPX、GpPER 和 GpUBP 基因的表达载体构建 | 第49-52页 |
| 4.3.2 植物表达载体转化根癌农杆菌 EHA105 | 第52页 |
| 4.3.3 烟草外植体的遗传转化 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53页 |
| 4.5 小结 | 第53-55页 |
| 5 毛尖紫萼藓复水 cDNA 文库的构建 | 第55-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第55页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第55-56页 |
| 5.2 实验方法 | 第56-61页 |
| 5.2.1 毛尖紫萼藓复水时间的选择 | 第56页 |
| 5.2.2 毛尖紫萼藓总 RNA 的提取 | 第56页 |
| 5.2.3 总 RNA 的纯化 | 第56页 |
| 5.2.4 cDNA 文库的构建 | 第56-61页 |
| 5.2.5 阳性克隆的测序及分析 | 第61页 |
| 5.3 结果与分析 | 第61-74页 |
| 5.3.1 毛尖紫萼藓复水时间的选择 | 第61页 |
| 5.3.2 总 RNA 的提取及检测 | 第61-62页 |
| 5.3.3 毛尖紫萼藓复水 cDNA 文库的构建 | 第62-65页 |
| 5.3.4 序列分析 | 第65-70页 |
| 5.3.5 复水 cDNA 文库与干旱 cDNA 文库的比较 | 第70-74页 |
| 5.4 讨论 | 第74-75页 |
| 5.5 小结 | 第75-76页 |
| 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84-85页 |
