| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表（Abbreviation） | 第11-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-36页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征 | 第14-28页 |
| 1.1.1 PRRS的流行病学 | 第14-15页 |
| 1.1.2 PRRSV的临床症状和病理变化 | 第15-17页 |
| 1.1.3 PRRSV的病原特性 | 第17-20页 |
| 1.1.4 PRRSV的分子生物学研究 | 第20-24页 |
| 1.1.5 PRRS的免疫学反应 | 第24-27页 |
| 1.1.6 PRRS的疫苗研究 | 第27-28页 |
| 1.2 PRRSV nsp2的结构与功能 | 第28-32页 |
| 1.2.1 PRRSV nsp2的结构 | 第28-30页 |
| 1.2.2 PRRSV nsp2的功能 | 第30-32页 |
| 1.3 蛋白质组学研究技术 | 第32-36页 |
| 1.3.1 蛋白质组学在病毒学中的应用 | 第33页 |
| 1.3.2 蛋白质组学在病毒蛋白与宿主蛋白相互作用方面的应用 | 第33-34页 |
| 1.3.3 稳定同位素标记氨基酸技术（SILAC） | 第34-36页 |
| 第2章 PRRSV流行病学调查和遗传变异分析 | 第36-65页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第36页 |
| 2.2 实验材料 | 第36-41页 |
| 2.2.1 病料、细胞、毒株、菌株和载体 | 第36-37页 |
| 2.2.2 工具酶及主要试剂 | 第37页 |
| 2.2.3 抗体及Western blot所需实验材料 | 第37-38页 |
| 2.2.4 培养基与抗生素及其配制 | 第38-39页 |
| 2.2.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第39-40页 |
| 2.2.6 主要实验仪器及设备 | 第40-41页 |
| 2.2.7 分子生物学分析软件 | 第41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-46页 |
| 2.3.1 病料采集与处理 | 第41页 |
| 2.3.2 病毒的分离 | 第41页 |
| 2.3.3 PRRSV的增殖 | 第41页 |
| 2.3.4 总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.3.5 两步法RT-PCR | 第42-43页 |
| 2.3.6 PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第43页 |
| 2.3.7 外源DNA片段与载体的连接反应 | 第43页 |
| 2.3.8 大肠杆菌感受态细胞的制备（氯化钙法） | 第43页 |
| 2.3.9 连接产物的转化 | 第43-44页 |
| 2.3.10 质粒的制备与鉴定 | 第44页 |
| 2.3.11 重组质粒（阳性质粒）的鉴定 | 第44页 |
| 2.3.12 PRRSV GP5序列和全基因组序列的测定 | 第44页 |
| 2.3.13 分离病毒的间接免疫荧光（IFA）鉴定 | 第44-45页 |
| 2.3.14 病毒空斑实验对病毒的分离纯化 | 第45页 |
| 2.3.15 半数细胞培养物感染量（TCID50）的测定 | 第45页 |
| 2.3.16 绝对荧光定量检测PRRSV病毒载量 | 第45-46页 |
| 2.3.17 Western blot检测病毒蛋白 | 第46页 |
| 2.4 结果与分析 | 第46-61页 |
| 2.4.1 2010年到2015年PRRSV流行状况分析 | 第46-48页 |
| 2.4.2 PRRSV ORF5基因序列分析 | 第48-51页 |
| 2.4.3 PRRSV WUH4毒株的全基因组序列分析 | 第51-54页 |
| 2.4.4 PRRSV WUH5和WUH6毒株的全基因组序列分析 | 第54-60页 |
| 2.4.5 重组毒株PRRSV WUH6的病毒增殖滴度测定 | 第60-61页 |
| 2.5 讨论 | 第61-65页 |
| 2.5.1 PRRSV新毒株的分离 | 第61-62页 |
| 2.5.2 PRRSV nsp2蛋白的变异分析 | 第62页 |
| 2.5.3 PRRSV GP5蛋白的变异分析 | 第62-63页 |
| 2.5.4 PRRSV重组分析 | 第63-65页 |
| 第3章 PRRSV nsp2蛋白与宿主蛋白相互作用组学研究 | 第65-102页 |
| 3.1 研究目的与意义 | 第65页 |
| 3.2 实验材料 | 第65-69页 |
| 3.2.1 细胞、毒株 | 第65页 |
| 3.2.2 载体与质粒 | 第65-67页 |
| 3.2.3 抗体及主要试剂 | 第67页 |
| 3.2.4 免疫沉淀（IP）、Co-IP及抗体交联实验所需材料 | 第67页 |
| 3.2.5 培养基及其配置 | 第67-68页 |
| 3.2.6 主要缓冲液与相关试剂及其配置 | 第68页 |
| 3.2.7 主要实验仪器及设备 | 第68-69页 |
| 3.2.8 分子生物学信息软件 | 第69页 |
| 3.3 实验方法 | 第69-78页 |
| 3.3.1 IFA和Western blot实验检测PRRSV nsp2蛋白表达水平 | 第69页 |
| 3.3.2 稳定同位素标记及用于IP实验的细胞样品制备 | 第69-70页 |
| 3.3.3 BCA法测定蛋白浓度 | 第70-71页 |
| 3.3.4 IP实验 | 第71-72页 |
| 3.3.5 SDS-PAGE蛋白胶银染 | 第72页 |
| 3.3.6 LC-MS/MS鉴定 | 第72-74页 |
| 3.3.7 生物信息学分析 | 第74-76页 |
| 3.3.8 质粒及siRNA的转染（脂质体介导转染法） | 第76页 |
| 3.3.9 IP和Co-IP实验对PRRSV nsp2与宿主蛋白互作的验证 | 第76-77页 |
| 3.3.10 PRRSV nsp2与宿主蛋白共定位观察 | 第77页 |
| 3.3.11 干扰宿主蛋白后PRRSV滴度的测定 | 第77页 |
| 3.3.12 统计学方法 | 第77-78页 |
| 3.4 结果与分析 | 第78-97页 |
| 3.4.1 用于nsp2相互作用组学的PRRSV感染时间点的确定 | 第78-79页 |
| 3.4.2 细胞标记测试结果 | 第79页 |
| 3.4.3 用于IP实验的全细胞裂解液蛋白浓度的测定 | 第79-81页 |
| 3.4.4 PRRSV nsp2互作蛋白鉴定的IP实验 | 第81页 |
| 3.4.5 PRRSV nsp2互作蛋白的质谱鉴定 | 第81-85页 |
| 3.4.6 PRRSV nsp2与其他病毒蛋白互作的验证 | 第85-86页 |
| 3.4.7 PRRSV nsp2互作蛋白的生物信息学分析 | 第86-89页 |
| 3.4.8 PRRSV nsp2与宿主蛋白互作的验证 | 第89-92页 |
| 3.4.9 PRRSV nsp2、N和vimentin蛋白复合物的验证 | 第92-94页 |
| 3.4.10 PRRSV nsp2互作宿主蛋白对PRRSV复制的影响 | 第94-96页 |
| 3.4.11 其他宿主蛋白的验证 | 第96-97页 |
| 3.5 讨论 | 第97-102页 |
| 3.5.1 本实验方案的优势 | 第97页 |
| 3.5.2 PRRSV nsp2与其他病毒蛋白的互作 | 第97-98页 |
| 3.5.3 PRRSV nsp2与宿主蛋白的互作 | 第98-100页 |
| 3.5.4 PRRSV nsp2功能的探讨 | 第100-102页 |
| 第4章 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-125页 |
| 附表 | 第125-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
| 个人简介及攻读期成果 | 第138-140页 |
