| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 1.1 脂肪组织与肥胖 | 第12-15页 |
| 1.2 脂肪形成的离体细胞模型 | 第15-16页 |
| 1.3 Wnt信号在脂肪形成中的作用 | 第16-18页 |
| 1.4 线粒体的生物合成和调控 | 第18-21页 |
| 1.5 脂肪形成中的线粒体生物合成 | 第21-23页 |
| 第二章 Wnt3a促进EMSC脂肪细胞的线粒体生物合成 | 第23-36页 |
| 2.1 前言 | 第23页 |
| 2.2 材料与方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.2 EMSC细胞的分离培养和诱导分化 | 第24页 |
| 2.2.3 RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.4 RNA纯化 | 第25页 |
| 2.2.5 cDNA合成 | 第25页 |
| 2.2.6 实时定量PCR | 第25-26页 |
| 2.2.7 脂肪细胞线粒体的分离 | 第26页 |
| 2.2.8 线粒体DNA拷贝数分析 | 第26页 |
| 2.2.9 数据分析 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-34页 |
| 2.3.1 Wnt3a上调线粒体生物合成基因的表达 | 第26-28页 |
| 2.3.2 Wnt3a促进线粒体拷贝数的增加 | 第28-29页 |
| 2.3.3 Sfrp5 KO小鼠的EMSC脂肪细胞中线粒体生物合成增加 | 第29页 |
| 2.3.4 其他Wnt配体在EMSC细胞中对线粒体生物合成的影响 | 第29-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 Wnt3a通过p38/CREB通路促进EMSC脂肪细胞中线粒体的生物合成 | 第36-51页 |
| 3.1 前言 | 第36-37页 |
| 3.2 材料与方法 | 第37-41页 |
| 3.2.1 试剂 | 第37页 |
| 3.2.2 EMSC细胞的分离培养和诱导分化 | 第37页 |
| 3.2.3 RNA提取和纯化 | 第37页 |
| 3.2.4 cDNA合成和实时定量PCR | 第37页 |
| 3.2.5 脂肪细胞线粒体的分离 | 第37页 |
| 3.2.6 线粒体DNA拷贝数分析 | 第37-38页 |
| 3.2.7 慢病毒干扰载体的构建 | 第38-40页 |
| 3.2.8 Western blot检测蛋白表达水平 | 第40页 |
| 3.2.9 数据分析 | 第40-41页 |
| 3.3 结果与分析 | 第41-49页 |
| 3.3.1 β-catenin慢病毒干扰载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.3.2 β-catenin敲除对EMSC脂肪细胞中线粒体生物合成的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.3 Wnt3a介导的线粒体生物合成不依赖于经典的Wnt/β-catenin信号通路 | 第43-46页 |
| 3.3.4 Wnt3a促进EMSC脂肪细胞中p38和CREB蛋白的磷酸化 | 第46-47页 |
| 3.3.5 Wnt3a通过p38/CREB信号通路调控脂肪细胞中线粒体的生物合成 | 第47-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 Wnt3a调控EMSC脂肪细胞中线粒体蛋白的乙酰化 | 第51-64页 |
| 4.1 前言 | 第51页 |
| 4.2 材料与方法 | 第51-53页 |
| 4.2.1 试剂 | 第51-52页 |
| 4.2.2 EMSC细胞的分离培养和诱导分化 | 第52页 |
| 4.2.3 EMSC脂肪细胞线粒体的分离 | 第52页 |
| 4.2.4 Western blot分析 | 第52页 |
| 4.2.5 蛋白组学分析 | 第52页 |
| 4.2.6 代谢组学分析 | 第52-53页 |
| 4.2.7 柠檬酸合成酶活性分析 | 第53页 |
| 4.2.8 数据分析 | 第53页 |
| 4.3 结果与分析 | 第53-62页 |
| 4.3.1 Wnt3a参与调控线粒体蛋白的乙酰化 | 第53-54页 |
| 4.3.2 识别乙酰化修饰受Wnt3a调控的线粒体蛋白 | 第54页 |
| 4.3.3 Wnt3a通过抑制去乙酰化酶调控线粒体蛋白的乙酰化修饰 | 第54-57页 |
| 4.3.4 Wnt3a促进柠檬酸合成酶活性和柠檬酸生成 | 第57-58页 |
| 4.3.5 Wnt3a调控线粒体蛋白的表达水平 | 第58-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第五章 Wnt3a调控米色脂肪细胞基因的表达 | 第64-70页 |
| 5.1 前言 | 第64页 |
| 5.2 材料与方法 | 第64-65页 |
| 5.2.1 试剂 | 第64-65页 |
| 5.2.2 EMSC细胞的分离培养和诱导分化 | 第65页 |
| 5.2.3 RNA提取和纯化 | 第65页 |
| 5.2.4 cDNA合成 | 第65页 |
| 5.2.5 实时定量PCR | 第65页 |
| 5.2.6 数据分析 | 第65页 |
| 5.3 结果与分析 | 第65-68页 |
| 5.3.1 Wnt3a促进米色脂肪细胞特异基因的表达 | 第65-66页 |
| 5.3.2 其他Wnt配体在EMSC脂肪细胞中对米色脂肪细胞特异基因表达的影响 | 第66-68页 |
| 5.4 讨论 | 第68-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 创新点 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-87页 |
| 附录 | 第87-88页 |
| 缩略词 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 作者简介 | 第90-91页 |
