| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 绪论 | 第19-30页 |
| 1.1 谷氨酰胺转氨酶的概述 | 第19-23页 |
| 1.1.1 谷氨酰胺转氨酶的催化反应 | 第19-20页 |
| 1.1.2 谷氨酰胺转氨酶的来源 | 第20-21页 |
| 1.1.3 谷氨酰胺转氨酶的结构 | 第21-22页 |
| 1.1.4 谷氨酰胺转氨酶的活化机制 | 第22-23页 |
| 1.2 谷氨酰胺转氨酶的应用 | 第23-25页 |
| 1.2.1 谷氨酰胺转氨酶在食品工业中的应用 | 第23-24页 |
| 1.2.2 谷氨酰胺转氨酶在其他工业中的应用 | 第24-25页 |
| 1.3 谷氨酰胺转氨酶的发酵生产 | 第25-27页 |
| 1.3.1 野生菌发酵生产谷氨酰胺转氨酶 | 第25-26页 |
| 1.3.2 基因工程菌表达生产谷氨酰胺转氨酶 | 第26-27页 |
| 1.4 谷氨酰胺转氨酶热稳定性的分子改造 | 第27-28页 |
| 1.5 大肠杆菌表达系统的概述 | 第28-29页 |
| 1.6 课题研究的目的意义及主要内容 | 第29-30页 |
| 1.6.1 题依据及研究意义 | 第29页 |
| 1.6.2 主要研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 谷氨酰胺转氨酶酶原在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第30-51页 |
| 2.1 材料与方法 | 第30-35页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第30-31页 |
| 2.1.2 主要试剂和材料 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要仪器和设备 | 第32-33页 |
| 2.1.4 培养基和主要溶液的配制 | 第33-35页 |
| 2.1.5 实验所用引物 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-42页 |
| 2.2.1 谷氨酰胺转氨酶酶原原始基因表达载体的构建 | 第35-38页 |
| 2.2.2 谷氨酰胺转氨酶酶原基因点突变表达载体的构建 | 第38-41页 |
| 2.2.3 工程菌的构建及诱导表达 | 第41页 |
| 2.2.4 目的蛋白的纯化及酶原激活 | 第41-42页 |
| 2.2.5 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 | 第42页 |
| 2.3 分析方法 | 第42-43页 |
| 2.3.1 细胞密度值的测定 | 第42-43页 |
| 2.3.2 DNA浓度的测定 | 第43页 |
| 2.4 结果与分析 | 第43-50页 |
| 2.4.1 表达载体的构建和鉴定 | 第43-45页 |
| 2.4.2 重组谷氨酰胺转氨酶酶原在大肠杆菌中的表达及纯化 | 第45-50页 |
| 2.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第三章 重组谷氨酰胺转氨酶的酶学性质及蛋白结构研究 | 第51-68页 |
| 3.1 材料与方法 | 第51-53页 |
| 3.1.1 菌株 | 第51-52页 |
| 3.1.2 主要试剂和材料 | 第52页 |
| 3.1.3 主要仪器和设备 | 第52-53页 |
| 3.1.4 培养基和主要溶液的配制 | 第53页 |
| 3.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 3.2.1 重组谷氨酰胺转氨酶的生产 | 第53页 |
| 3.2.2 重组谷氨酰胺转氨酶酶学性质的研究 | 第53-54页 |
| 3.2.3 圆二色光谱仪分析重组重组谷氨酰胺转氨酶的二级结构 | 第54页 |
| 3.2.4 重组谷氨酰胺转氨酶的结构模拟 | 第54-55页 |
| 3.3 分析方法 | 第55-56页 |
| 3.3.1 细胞密度值的测定 | 第55页 |
| 3.3.2 蛋白含量的测定 | 第55页 |
| 3.3.3 谷氨酰胺转氨酶比酶活的测定 | 第55-56页 |
| 3.3.4 数据处理 | 第56页 |
| 3.4 结果与分析 | 第56-66页 |
| 3.4.1 蛋白含量标准曲线及重组谷氨酰胺转氨酶蛋白含量的测定 | 第56页 |
| 3.4.2 酶活标准曲线及重组谷氨酰胺转氨酶比酶活的测定 | 第56-57页 |
| 3.4.3 重组谷氨酰胺转氨酶酶学性质的研究 | 第57-64页 |
| 3.4.4 重组谷氨酰胺转氨酶的结构研究 | 第64-66页 |
| 3.5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第四章 大肠杆菌产谷氨酰胺转氨酶的发酵条件优化 | 第68-85页 |
| 4.1 材料与方法 | 第68-69页 |
| 4.1.1 菌株 | 第68页 |
| 4.1.2 主要试剂和材料 | 第68-69页 |
| 4.1.3 主要仪器和设备 | 第69页 |
| 4.1.4 培养基和主要溶液的配制 | 第69页 |
| 4.2 实验方法 | 第69-72页 |
| 4.2.1 重组谷氨酰胺转氨酶的生产 | 第69-70页 |
| 4.2.2 大肠杆菌产谷氨酰胺转氨酶的摇瓶发酵条件优化 | 第70-72页 |
| 4.3 分析方法 | 第72页 |
| 4.3.1 细胞密度值的测定 | 第72页 |
| 4.3.2 蛋白含量的测定 | 第72页 |
| 4.3.3 谷氨酰胺转氨酶比酶活的测定 | 第72页 |
| 4.3.4 数据处理 | 第72页 |
| 4.4 结果与分析 | 第72-84页 |
| 4.4.1 大肠杆菌生长曲线及种龄的确定 | 第72-73页 |
| 4.4.2 大肠杆菌发酵培养基的优化 | 第73-75页 |
| 4.4.3 大肠杆菌发酵条件的优化 | 第75-84页 |
| 4.5 本章小结 | 第84-85页 |
| 第五章 主要结论和展望 | 第85-88页 |
| 5.1 主要结论 | 第85-86页 |
| 5.2 展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-101页 |
| 附录 氨基酸名称中英文对照 | 第101-102页 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果情况 | 第102页 |
