| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第15-25页 |
| 1.1 前言 | 第15-16页 |
| 1.2 植物转录因子的研究概况 | 第16-21页 |
| 1.2.1 植物转录因子的结构和分类 | 第16-17页 |
| 1.2.2 植物逆境相关转录因子研究现状 | 第17-21页 |
| 1.3 植物转录因子功能的研究方法 | 第21-24页 |
| 1.3.1 酵母双杂交系统 | 第21-22页 |
| 1.3.2 酵母单杂交系统 | 第22页 |
| 1.3.3 瞬时表达实验 | 第22-23页 |
| 1.3.4 染色质免疫共沉淀 | 第23页 |
| 1.3.5 cDNA微阵列 | 第23-24页 |
| 1.4 研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 拟南芥ANAC069基因的组织特异性表达和亚细胞定位 | 第25-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第25页 |
| 2.1.2 菌种与载体 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25页 |
| 2.1.4 溶液配制 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 拟南芥基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 GUS染色分析ANAC069基因的表达 | 第26-30页 |
| 2.2.3 实时定量PCR分析ANAC069的表达模式 | 第30-31页 |
| 2.2.4 ANAC069基因的亚细胞定位 | 第31-35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-38页 |
| 2.3.1 ANAC069基因的组织特异性表达 | 第35-36页 |
| 2.3.2 ANAC069的表达模式 | 第36-37页 |
| 2.3.3 ANAC069基因的亚细胞定位 | 第37-38页 |
| 2.4 本章讨论 | 第38-39页 |
| 2.4.1 启动子在植物基因工程研究中的重要作用 | 第38-39页 |
| 2.4.2 ANAC069基因的亚细胞定位研究 | 第39页 |
| 2.5 本章小结 | 第39-40页 |
| 3 非生物胁迫下ANAC069基因的功能分析 | 第40-69页 |
| 3.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第40页 |
| 3.1.2 菌株和载体 | 第40页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.4 溶液配制 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-53页 |
| 3.2.1 pROKⅡ -ANAC069过表达载体的构建及遗传转化 | 第41-43页 |
| 3.2.2 双引物法筛选突变体株系 | 第43-45页 |
| 3.2.3 实时定量PCR分析ANAC069在不同株系中的表达 | 第45页 |
| 3.2.4 萌发率、根长、鲜重和存活率实验 | 第45-46页 |
| 3.2.5 非生物胁迫下不同株系的ROS水平和细胞死亡检测 | 第46-47页 |
| 3.2.6 非生物胁迫下ANAC069基因的生理学角色分析 | 第47-51页 |
| 3.2.7 实时定量PCR分析不同株系的逆境反应相关基因表达情况 | 第51-53页 |
| 3.3 结果与分析 | 第53-65页 |
| 3.3.1 ANAC069过表达株系的获得 | 第53-55页 |
| 3.3.2 ANAC069纯合突变体株系的获得 | 第55-56页 |
| 3.3.3 ANAC069在过表达株系和突变体株系中的表达情况 | 第56-57页 |
| 3.3.4 萌发率、根长、鲜重和存活率统计 | 第57-60页 |
| 3.3.5 非生物胁迫下不同株系中ROS水平和细胞死亡情况 | 第60-61页 |
| 3.3.6 ANAC069的生理学角色 | 第61-63页 |
| 3.3.7 逆境反应相关基因在不同株系中的差异表达 | 第63-65页 |
| 3.4 本章讨论 | 第65-68页 |
| 3.4.1 ANAC069过表达株系对非生物胁迫高度敏感 | 第65-66页 |
| 3.4.2 ANAC069基因是拟南芥活性氧防御系统中的负调节因子 | 第66-67页 |
| 3.4.3 ANAC069通过抑制P5CS基因表达来减少植物体内脯氨酸积累 | 第67页 |
| 3.4.4 非生物胁迫下不同株系的质膜损伤研究 | 第67-68页 |
| 3.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 4 拟南芥ANAC069转录因子互作蛋白的研究 | 第69-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第69-70页 |
| 4.1.1 菌株和载体 | 第69页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 4.1.3 培养基 | 第69-70页 |
| 4.1.4 溶液配制 | 第70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-75页 |
| 4.2.1 酵母双杂交Bait表达载体(pGBKT7-ANAC069)的构建 | 第70-71页 |
| 4.2.2 Bait蛋白的自激活及毒性检测 | 第71-72页 |
| 4.2.3 ANAC069转录激活区的确定及用于双杂交的bait片段的分析 | 第72-73页 |
| 4.2.4 Bait蛋白(pGBKT7-ANAC069△C1)筛选cDNA文库 | 第73页 |
| 4.2.5 候选Prey质粒的分离和鉴定 | 第73-75页 |
| 4.3 结果与分析 | 第75-79页 |
| 4.3.1 Bait表达载体(pGBKT7-ANAC069)的获得 | 第75页 |
| 4.3.2 Bait蛋白无毒性,具有转录自激活活性 | 第75页 |
| 4.3.3 ANAC069转录激活区和双杂交的bait片段的确定 | 第75-76页 |
| 4.3.4 ANAC069互作蛋白质的筛选 | 第76-77页 |
| 4.3.5 ANAC069互作蛋白质的验证 | 第77-79页 |
| 4.4 本章讨论 | 第79-80页 |
| 4.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 5 ANAC069上游表达调控因子研究 | 第81-101页 |
| 5.1 实验材料 | 第81页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第81页 |
| 5.1.2 菌种与载体 | 第81页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第81页 |
| 5.1.4 溶液配制 | 第81页 |
| 5.2 实验方法 | 第81-90页 |
| 5.2.1 ANAC069启动子的生物信息学分析 | 第81-82页 |
| 5.2.2 酵母单杂交钓取能够识别DOF元件的基因 | 第82-84页 |
| 5.2.3 酵母单杂交分析转录因子ATDOF5.8与DOF元件的特异性结合 | 第84-85页 |
| 5.2.4 酵母单杂交分析ATDOF5.8与ANAC069启动子的互作 | 第85-86页 |
| 5.2.5 瞬时表达实验证实ATDOF5.8与ANAC069启动子的互作 | 第86-88页 |
| 5.2.6 色质免疫共沉分析ATDOF5.8与ANAC069启动子的体内结合 | 第88-90页 |
| 5.2.7 ANAC069及其上游调控基因ATDOF5.8的表达模式 | 第90页 |
| 5.3 结果与分析 | 第90-99页 |
| 5.3.1 ANAC069启动子中逆境反应相关元件分析 | 第90-91页 |
| 5.3.2 酵母单杂交鉴定能够识别DOF元件的基因 | 第91-92页 |
| 5.3.3 ATDOF5.8蛋白与DOF元件的特异性结合 | 第92-93页 |
| 5.3.4 ATDOF5.8蛋白对ANAC069基因启动子片段的识别 | 第93-95页 |
| 5.3.5 瞬时表达实验证实互作结果 | 第95-97页 |
| 5.3.6 染色质免疫共沉研究ATDOF5.8与ANAC069启动子的结合 | 第97-98页 |
| 5.3.7 ATDOF5.8及ANAC069基因的表达模式分析 | 第98-99页 |
| 5.4 本章讨论 | 第99-100页 |
| 5.5 本章小结 | 第100-101页 |
| 6 ANAC069转录因子识别的顺式作用元件研究 | 第101-121页 |
| 6.1 实验材料 | 第101页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第101页 |
| 6.1.2 菌株和载体 | 第101页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第101页 |
| 6.1.4 培养基 | 第101页 |
| 6.2 实验方法 | 第101-109页 |
| 6.2.1 酵母单杂交研究ANAC069蛋白与NACRS序列的结合 | 第101-104页 |
| 6.2.2 瞬时表达实验证实ANAC069与NACRS的互作 | 第104-107页 |
| 6.2.3 cDNA微阵列分析不同株系的表达谱 | 第107页 |
| 6.2.4 ANAC069能够识别的其它顺式作用元件分析 | 第107-109页 |
| 6.3 结果与分析 | 第109-119页 |
| 6.3.1 ANAC069能够特异性的结合NACRS序列 | 第109-111页 |
| 6.3.2 ANAC069在烟草体内特异性识别NACRS序列 | 第111-113页 |
| 6.3.3 过表达株系和突变体株系中的差异表达基因 | 第113-116页 |
| 6.3.4 ANAC069与假定顺式作用元件的互作 | 第116-119页 |
| 6.4 本章讨论 | 第119-120页 |
| 6.5 本章小结 | 第120-121页 |
| 7 讨论 | 第121-124页 |
| 结论 | 第124-125页 |
| 参考文献 | 第125-136页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第136-137页 |
| 致谢 | 第137-138页 |
