| 学位论文数据集 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 手性化合物与生物不对称合成 | 第11-17页 |
| 1.1.1 引言 | 第11页 |
| 1.1.2 生命中的手性化合物 | 第11-13页 |
| 1.1.3 手性药物及手性中间体的合成 | 第13-15页 |
| 1.1.3.1 化学拆分法 | 第13页 |
| 1.1.3.2 不对称合成 | 第13页 |
| 1.1.3.3 微生物或酶催化拆分 | 第13-15页 |
| 1.1.4 生物不对称合成与转化的应用与展望 | 第15-17页 |
| 1.2 γ-内酰胺的酶法拆分 | 第17-18页 |
| 1.2.1 γ-内酰胺简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2 拆分γ-内酰胺的研究进展 | 第18页 |
| 1.2.2.1 色谱分离法 | 第18页 |
| 1.2.2.2 微生物酶法 | 第18页 |
| 1.3 酰胺酶及(-)γ-内酰胺酶的分离纯化 | 第18-19页 |
| 1.4 课题的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 (-)γ-内酰胺酶的分离纯化 | 第21-45页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-33页 |
| 2.2.1 主要试剂、药品和材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第23-33页 |
| 2.2.3.1 菌种培养 | 第23页 |
| 2.2.3.2 确定分光光度法测定酶的活力的条件 | 第23-24页 |
| 2.2.3.3 HPLC确定各个步骤酶活力和ee值 | 第24-25页 |
| 2.2.3.4 底物在不同pH下的自发水解作用 | 第25页 |
| 2.2.3.5 目的蛋白在细胞内的定位以及破碎条件的选择 | 第25-26页 |
| 2.2.3.6 硫酸铵沉淀条件的选择 | 第26页 |
| 2.2.3.7 透析 | 第26-27页 |
| 2.2.3.8 确定phenyl-sepharose的最佳分离条件 | 第27-29页 |
| 2.2.3.9 确定DEAE-sepharose的最佳分离条件 | 第29页 |
| 2.2.3.10 确定凝胶层析sephacryl S 200的分离条件 | 第29-30页 |
| 2.2.3.11 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-31页 |
| 2.2.3.12 酶比活力和纯化倍数的确定 | 第31-33页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第33-45页 |
| 2.3.1 酶活力和转化产物的光学纯度的测定方法 | 第33-34页 |
| 2.3.2 底物无自发水解作用 | 第34-35页 |
| 2.3.3 细胞破碎条件 | 第35-36页 |
| 2.3.4 硫酸铵沉淀条件 | 第36-37页 |
| 2.3.5 透析 | 第37-39页 |
| 2.3.6 phenyl-sepharose的最佳分离条件 | 第39-40页 |
| 2.3.7 DEAE-sepharose的最佳分离条件 | 第40-41页 |
| 2.3.8 分子筛sephacryl S 200的分离条件 | 第41-42页 |
| 2.3.9 SDS-PAGE | 第42页 |
| 2.3.10 蛋白纯化结果 | 第42-45页 |
| 第三章 蛋白测序和酶学性质的研究 | 第45-57页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 材料与方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 主要实验材料 | 第45-46页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第46页 |
| 3.2.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.2.3.1 测定酶的最适pH | 第46页 |
| 3.2.3.2 测定酶的最适温度和最耐温度 | 第46页 |
| 3.2.3.3 测定金属离子对酶活力和转化产物的光学纯度的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.3.4 测定酶促反应的米氏常数Km | 第47页 |
| 3.2.3.5 目的蛋白活性染色 | 第47-49页 |
| 3.2.3.6 胶内酶切及质谱测序 | 第49页 |
| 3.2.3.7 Western-blot及氨基酸N-端测序 | 第49-50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-57页 |
| 3.3.1 酶的最适pH | 第50-51页 |
| 3.3.2 酶的最适温度和最耐温度 | 第51-53页 |
| 3.3.3 金属离子对酶活力和转化产物的光学纯度的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.4 酶促反应的K | 第54页 |
| 3.3.5 目的蛋白活性染色结果 | 第54页 |
| 3.3.6 质谱测序结果 | 第54-55页 |
| 3.3.7 氨基酸N-端测序结果 | 第55-57页 |
| 第四章 结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录1 | 第63-67页 |
| 附录2 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第71-73页 |
| 作者及导师简介 | 第73-74页 |
| 附件 | 第74-75页 |
